[发明专利]一种猪等孢球虫rRNA基因序列及其获取方法有效
| 申请号： | 201710051773.6 | 申请日： | 2017-01-19 |
| 公开（公告）号： | CN106801052B | 公开（公告）日： | 2019-07-16 |
| 发明（设计）人： | 戚南山;林栩慧;孙铭飞;廖申权;吕敏娜;吴彩艳;李娟;张健騑;谢明权 | 申请（专利权）人： | 广东省农业科学院动物卫生研究所 |
| 主分类号： | C12N15/11 | 分类号： | C12N15/11;C12N15/10;C12R1/90 |
| 代理公司： | 无锡市汇诚永信专利代理事务所(普通合伙) 32260 | 代理人： | 张欢勇 |
| 地址： | 510000 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 种猪 孢球虫 rrna 基因 序列 及其 获取 方法 | ||
本发明涉及生物基因工程技术领域，根据Genbank上Is 18S rRNA基因全序列(U97523.1)及Is ITS1基因序列(LC085519.1)设计引物，以Is基因组DNA(gDNA)为模板，PCR方法扩增获得Is‑18S rRNA基因序列；根据所获得Is‑18S rRNA及Is‑ITS1基因序列，分别设计三条同向且退火温度较高的特异性引物，利用Genome walking技术克隆获得Is‑18S‑ITS1‑5.8S‑ITS2‑28S rRNA基因全长序列，从而为猪等孢球虫新一代检测方法的建立打下基础。
技术领域
本发明涉及生物基因工程技术领域，更具体的说，涉及一种猪等孢球虫rRNA基因序列及其获取方法。
背景技术
猪等孢球虫病是一种由等孢属(Isospora)球虫引起的寄生性原虫病，可引起仔猪严重消化道疾病、腹泻、消瘦、发育受阻甚至死亡，其仔猪发病率可高达50％-75％，死亡率高达75％，呈世界性流行，严重危害养猪业发展。
核糖体RNA(rRNA)是细胞中含量最多的RNA，约占RNA总量的82％，与多种蛋白质结合组成核糖体，是细胞内蛋白质合成的分子机器。rRNA基因序列既含有高度保守的序列区域，又有中度保守和高度变化的序列区域，但同种生物细胞完全一致或极少差异，且在生物进化的漫长经历中几乎保持不变，因此rRNA基因序列的差异被广泛认为是各类生物亲缘关系的“分子尺”。目前尚未见猪等孢球虫(Isospora suis,Is)rRNA基因完整序列的研究报道。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于提供一种猪等孢球虫rRNA基因序列及其获取方法，根据Genbank上Is 18S rRNA基因全序列(U97523.1)及Is ITS1基因序列(LC085519.1)设计引物，以Is基因组DNA(gDNA)为模板，PCR方法扩增获得Is-18S rRNA基因序列；根据所获得Is-18S rRNA及Is-ITS1基因序列，分别设计三条同向且退火温度较高的特异性引物，利用Ge nome walking技术克隆获得Is-18S-ITS1-5.8S-ITS2-28S rRNA基因全长序列，从而为猪等孢球虫新一代检测方法的建立打下基础。
本发明所要解决的技术问题采用以下技术方案来实现。
一种猪等孢球虫rRNA基因序列，它包括Is-HN 18S rRNA-ITS1-5.8S-ITS2-28S基因序列，所述的基因序列为：
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