[发明专利]一种药物组合物及其应用

权利要求书

1.PD-1抗体和非特异性扩增激活T细胞在制备治疗肾癌的药物中的用途；其中所述PD-1抗体的浓度为1-10mg/kg病人体重；所述非特异性扩增激活T细胞的数量为3-12×10⁹个/次；其中所述非特异性扩增激活T细胞的制备方法包括如下步骤：

(1)抽取病人外周血50mL，肝素钠抗凝，分装在两个50mL的离心管内800g、4℃离心15min；

(2)离心后抽取上层血浆于50mL离心管中放于4℃冰箱中保存；

(3)将离心管中的血细胞与生理盐水1:1稀释，缓慢加至淋巴细胞细胞分离液上层，800g、20℃离心17min；

(4)离心后提取单个核细胞即白膜层置于50mL离心管内，加入生理盐水洗涤，300g、4℃离心8min，洗2遍；

(5)细胞计数后将细胞进行CD4和CD8磁珠分选，并将获得的CD4+T细胞和CD8+T细胞按细胞数量比1:1进行混合，细胞接种在包被过RetroNectin60μL/瓶、CD3单抗15μL/瓶、PBS 10mL/瓶的培养瓶内，加入完全培养液50-60mL，所述完全培养基为无血清培养液中加入IL-2为1000IU/mL，IFN-γ为1000IU/mL，庆大霉素为160IU/mL，IL-1α为50-150IU/mL，5％自体血浆，放入5％CO₂培养箱中，37℃进行非特异性扩增激活T细胞的培养；

(6)隔日显微镜下观察，根据细胞状态和数量适量补充完全培养基；

(7)14d后非特异性扩增激活T细胞成熟，提前进行质控检测，合格后回收细胞，用生理盐水洗3遍，重悬后低速离心、弃上清，用适量含有 20％白蛋白的生理盐水重悬细胞，得到的细胞即为非特异性扩增激活T细胞。

2.如权利要求1所述的用途，其中抗体的用量为2mg/kg，细胞为5.83×10⁹个。

3.如权利要求1所述的用途，其特征在于， 所述药物还包括药学上接受的辅料。

4.如权利要求3所述的用途，其特征在于，所述辅料为赋形剂、稀释剂、载体、调味剂、粘合剂和填充剂中的任意一种或至少两种的组合。