[发明专利]一种双酚A适配体亲和柱及其制备方法和用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种双酚A的适配体亲和柱及其制备方法和用途。属食品安全检测领域。

背景技术

双酚A 是2，2-双（4-羟基苯基）丙烷的俗称，又称二酚基丙烷， 由2 分子苯酚和1 分子丙酮在酸性介质中催化缩合而成的酚类物质。它是生产聚碳酸酯（Polycarbonate，PC） 及环氧树脂（epoxyResin，EP）的主要原料，又可用作酚醛树脂、可塑性聚酯、抗氧剂及聚氯乙烯（PVC）稳定剂等。在食品包装方面， 添加BPA 的塑料具有无色透明、耐用、轻便以及抗摔等特性，在食品包装材料、容器内壁涂料等方面有着重要的用途，尤以婴儿奶瓶，金属罐容器的内涂层最为普遍存在。

双酚A 可通过食品包装和塑料薄膜迁移到食品或是饮料中，被人体吸收，进而逐步危害人体健康，可使人类和野生动物的内分泌系统、免疫系统、神经系统出现异常，还会严重干扰人类和动物的生殖遗传功能。研究报道，双酚A 具有雌性激素的特性，对肝脏、肾脏、乳腺有一定的损伤; 同时双酚A 也与肥胖症、糖尿病以及男性不孕有关，研究证实，低剂量的双酚A( 10 ^-7 mol /L) 即能引起支持细胞和精子细胞死亡。双酚A 的危害已引起诸多研究者及世界卫生组织的广泛关注，很多国家已经颁布了相关法律，禁止在食品包装材料中添加含双酚A 的物质，尤其是婴儿用品。2014 年，欧洲食品安全局提议将目前双酚A 每日最大摄入量由0．05 mg /( kg·d) 降低到0．005 mg /( kg·d) 。1994 年，我国公布的卫生标准中对双酚A 用量规定为每升蒸馏水中所含的双酚A 要小于0.05 mg。尽管目前对双酚A 的限量在不断降低，但由于管理不够规范，人们在日常生活中经常食用的食品常常使用以双酚A 作为添加剂的材料包装。有研究表明，在某些食品、纸杯、人体血液、人体尿液、人体唾液、自然界中的水、奶瓶等样品中均可检测出双酚A。由于双酚A 危害极大，因此建立检出限低、准确、快速的双酚A 检测方法尤为重要。

双酚A的检测方法包括荧光法、酶联免疫吸附法、紫外分光光度法、气相色谱发及高效液相色谱法等。

紫外分光光度法利用双酚A在278nm波长是具有吸收峰来检测，其优点是操作简单便捷。但此方法受到环境影响及溶剂影响很大，准确度不高，并且变异较大。

酶联免疫吸附技术法利用抗原抗体特异性结合的特点来检测，具有特异性高，灵敏性强，且检测成本低的优点。BPA 是一种小分子，不能直接用于免疫动物， 但可以与抗体发生特异性结合反应。竞争型酶联免疫吸附分析法（ELISA）就是利用这种特性。石春红[食品工业科技，2011（01），290-292]等建立了间接竞争ELISA检测双酚A的方法，检测限为1 ng/mL， 对PC 材质的桶装水做回收试验， 回收率为92.5%～107.7%。但是由于双酚A是小分子，免疫原性弱，难以获得高亲和力的抗体。从而限制了此方法的开发。

原子荧光光谱法是以原子在辐射能激发下发射的荧光强度进行定量分析的发射光谱分析法．唐舒雅等[工业水处理，２００６，２６（３）：７４－７６］利用在ｐＨ＝１的酸性介质中，β－环糊精对ＢＰＡ荧光强度有增强作用的特点，建立了荧光测定法．该方法的线性范围为0.4-300ug/L，相对标准偏差为1.3%，检出限为0.02ug/L。

高效液相色谱法( HPLC)具有准确度高、灵敏性强、可微量测定等优点,是目前常用于食品中小分子检测的方法。尤其是高效液相色谱-质谱联用技术在双酚A的检测中广泛应用。但因其此方法对样品中小分子纯度的要求较高,导致检测成本高、周期长,无法满足大批量样品快速筛选的需要,所以使用受到限制。今年来发展起来的固相萃取柱-高效液相色谱（SPE-HPLC)）将固相萃取技术与高效液相色谱相结合。使HPLC的使用更加广泛。固相萃取作为一种新的净化技术,在食品安全分析检测中应用越来越广泛。它是将疏水性固相载体上填充柱管制备而成。当样品提取液通过柱子时,由于样本中物质的极性的不同而分离开来。分步洗脱就能得到纯度较高的目的物。

但是由于样本中成分复杂，很多物质都具有相似的极性，导致固相萃取得到的洗脱产物常常组分较多。导致固相萃取得到的双酚A杂质较多，影响随后的HPLC检测。因而，需要一种特异性的双酚A纯化方法。