[发明专利]特发性膜性肾病双联检测试剂盒

说明书

[技术领域]

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种特发性膜性肾病检测试剂盒。

[背景技术]

全世界有超过5亿人患有不同程度的慢性肾脏病，慢性肾脏病已成为继肿瘤、心脑血管病、糖尿病之后，又一威胁人类健康的重要疾病，成为全球性的重要公共卫生问题。在我国，慢性肾脏病的发病率为10％～13％。中国人口众多，慢性肾脏病患者的总数庞大，这无疑已成为我国沉重的社会和经济负担。膜性肾病按发病原因可分为特发性和继发性膜性肾病，其诊断上要依靠临床表现，肾脏穿刺术的组织学检查或肾组织电镜检查。肾脏穿刺术是一种侵入式的诊断方法，对病人有一定的伤害；肾组织电镜检测对设备要求很高，难以普及使用；而血清标志物检测可以为特发性膜性肾病的初筛和病情监测提供辅助作用。因此，开发非创伤、低风险、安全、廉价、精确的快速检测试剂盒有重要意义。

检测抗PLA2R(或抗THSD7A)抗体的方法有双抗原夹心法和间接法

双抗原夹心免疫层析法：检测时，当样本中含有抗PLA2R(或抗THSD7A)抗体时，将与玻璃纤维上包被的重组人PLA2R蛋白(或重组人THSD7A蛋白)的金标记物结合形成复合物，在层析作用下反应复合物沿着硝酸纤维素膜移动至检测区(T)，被硝酸纤维素膜上检测区(T)内包被的重组人PLA2R蛋白(或重组人THSD7A蛋白)所捕获，在检测区(T)内出现一条紫红色条带。相反，当样本中不含抗PLA2R(或抗THSD7A)抗体时，则检测区(T)内无紫红色条带出现。

间接免疫层析法：在玻璃纤维膜上预包被金标鼠抗人lgG4抗体(anti-lgG4Ab)，在硝酸纤维素膜上检测线和对照线处分别包被重组人PLA2R蛋白(或重组人THSD7A)和羊抗鼠二抗。检测阳性样本时，血清样本中PLA2R-Ab(或THSD7A-Ab)与胶体金标记鼠抗人lgG4抗体结合形成复合物，由于层析作用复合物沿纸条向前移动，经过检测线时与预包被的抗原结合形成“Au-anti-lgG4Ab-PLA2R Ab-PLA2R Ag”(或Au-anti-lgG4Ab-THSD7A Ab-THSD7A Ag)夹心物而凝聚显色，游离的鼠抗人lgG4抗体金标记物则在对照线处与羊抗鼠二抗结合而富集显色。阴性标本则仅在对照线处显色，15分钟内观察结果即可。

免疫层析法：一份样品在检测装置的毛细管作用的带动下与标记好检测抗体的可见颗粒(胶体金、乳胶、量子点、荧光微球或酶促反应)流经由捕获抗体时发生免疫反应而形成的可见检测线或者检测斑点。该方法具有操作简便、反应快速、敏感度高、特异性强、适合现场检测和经济实用等优点。

中国发明专利CN201610201970.7公开了一种特发性膜性肾病ELISA检测试剂盒及其检测方法，该专利利用直接ELISA法，定量检测人血清中的anti-PLA2R和anti-THSD7A自身抗体来筛查特发性膜性肾病，该方法耗时长(2-3小时)；需要在专业场所，专业人员和设备进行检测；检测费用高，不利于基层大规模筛查特发性模型肾病。

[发明内容]

为了解决上述现有技术存在的问题，本发明提供一种免疫层析法快速检测血清中anti-PLA2R和anti-THSD7A自身抗体来筛查特发性膜性肾病，该方法检测时间短(10-15min)；无需专业场所，专业人员和设备进行检测；检测费用低，适合基层大规模筛查特发性模型肾病。

为了实现上述目的，发明一种特发性膜性肾病双联检测试剂盒(间接免疫层析法)，包括：

a.anti-PLA2R Ab试纸条

包括含有显色标记的鼠抗人lgG4抗体(anti-lgG4Ab)的anti-lgG4金垫，以及含有PLA2R蛋白的检测线和含有羊抗鼠IgG的质控线的硝酸纤维素膜。

b.anti-THSD7A Ab试纸条

包括含有显色标记的鼠抗人lgG4抗体(anti-lgG4Ab)的anti-lgG4金垫，以及含有THSD7A蛋白的检测线和含有羊抗鼠IgG质控线的硝酸纤维素膜。

该检测试剂盒还具有如下优化方案：

所述的显色标记为以胶体金、乳胶颗粒、荧光微球、量子点、化学发光或者酶标记物及可通过肉眼或者仪器进行检测的分子或者颗粒物标记鼠抗人lgG4抗体。