[发明专利]一种修饰的siRNA及其用途

说明书

本发明公开了一种修饰的siRNA及用途。本发明以吉西他滨为siRNA修饰单体为例，对靶向RRM1mRNA的siRNA进行特异性地有效修饰，获得一种新型的小分子靶向化合物Gem‑RRM1siRNA，不仅能有效抑制胰腺癌细胞增殖，还能增强RRM1siRNA逆转吉西他滨耐药胰腺癌细胞的作用，起到协同抑制肿瘤的效果。可以预见：具有生物活性或细胞毒性的核苷类似物应当也可以作为siRNA修饰单体，对特定的siRNA进行特异性地有效修饰后，二者起到协同作用，可应用于疾病治疗药物开发和制备。

技术领域

本发明涉及siRNA领域，具体地涉及一种修饰的siRNA及其用途。

背景技术

siRNA是一种长度20到25个核苷酸的双链RNA，通过识别并结合与其序列互补的mRNA，促使靶mRNA降解而引起RNA干扰，最终使目的基因沉默。由于siRNA能直接在基因水平干扰关键靶点的功能，不需要依赖靶点蛋白的晶体结构确证的siRNA成为了小分子靶向药物的候选分子，已在各类疾病治疗中显示出巨大的潜力和应用前景。以肿瘤治疗为例，siRNA药物能稳定传递siRNA定向进入肿瘤组织，精确干扰细胞信号通路，达到治疗肿瘤的目的。

然而，siRNA药物在应用中存在一些问题，如：siRNA容易被核酸酶降解，在体内的半衰期非常短，无法确保siRNA分子到达机体的正确部位，而且容易引起机体严重的免疫反应。近年来研究发现，对siRNA进行化学修饰，能使siRNA在体内的稳定性得到很大的提高，使其在细胞和血液中的半衰期从几分钟延长到几天，同时降低了机体对siRNA的免疫反应和siRNA本身脱靶效应。例如，Alnylam公司采用半乳糖胺共轭修饰的siRNA获得的药物ALN-AT3，能稳定有效传递特定的siRNA，于2013年8月被美FDA批准用于治疗A型血友病。

目前，siRNA的化学修饰主要包括对糖基、主链和末端的修饰。对糖基的修饰常见甲基化、甲氧乙基化和氟基化等2-羟基修饰方式，可在提高siRNA稳定性的同时增强siRNA与互补mRNA的结合能力；主链修饰主要为P-S修饰，可在保持siRNA结合能力的同时增强其核酸酶抗性，但也有研究表明，过度修饰会引发严重的毒性反应；对siRNA末端的修饰包括聚乙二醇修饰和胆固醇修饰等：聚乙二醇因其具有降低细胞毒性、增强水溶性和屏蔽负电荷等特有的生物学性状；胆固醇修饰则利用胆固醇能结合低密度脂蛋白和高密度脂蛋白等体内转运载体的特性，在提高siRNA半衰期的同时，通过与肝脏表达的低密度脂蛋白受体相结合，促进肝细胞对siRNA的摄取，可应用于肝脏疾病的治疗。

部分核苷类似物具有抗肿瘤作用，例如治疗结肠癌的一线药物5-FU，治疗血液病的5-氮杂胞苷，治疗胰腺癌的吉西他滨(Gemcitabine，简称Gem)等。吉西他滨是目前临床上常用的核苷类抗肿瘤药物，已广泛应用于临床治疗各种肿瘤和血液病，目前是治疗胰腺癌的唯一有效药物。遗憾的是，病人在使用吉西他滨几周之内就会产生耐药性，因此吉西他滨治疗胰腺癌的效果非常有限。核糖核酸还原酶M1(ribonucleotide reductase M1subunit,RRM1)过表达是吉西他滨产生耐药的主要机制之一。临床和基础的研究表明RRM1的水平和病人的生存率相关，高水平的RRM1的病人生存率较低；研究表明抑制了RRM1的表达，细胞对吉西他滨的敏感性增高。

发明内容

本发明的目的在于提供一种修饰的siRNA，是用具有生物活性或细胞毒性的核苷类似物对siRNA进行修饰而成，具有生物活性或细胞毒性的核苷类似物优选为吉西他滨或吉西他滨结构类似物。

本发明的另一目的在于提供修饰的siRNA在制备肿瘤治疗药物中的应用，特别是吉西他滨修饰的RRM1 siRNA在制备肿瘤治疗药物中的应用。

本发明所采取的技术方案是：

一种修饰的siRNA，所述修饰为：

初始siRNA末端偶联有至少一个具有生物活性或细胞毒性的核苷类似物单体；