[发明专利]同时检测葡萄溃疡病菌和葡萄蔓枯病菌的引物及其应用

说明书

本发明公开了一组同时检测葡萄溃疡病菌和葡萄蔓枯病菌的双重PCR引物及其应用。该组引物，由序列表中序列1所示的核苷酸、序列表中序列2所示的核苷酸、序列表中序列3所示的核苷酸和序列表中序列4所示的核苷酸组成。这组引物可以在一个双重PCR反应中分别检测到我国3个葡萄溃疡病菌优势种——小新壳梭孢、可可毛色二孢和葡萄座腔菌与4种葡萄蔓枯病菌的存在，这表明该组引物可以快速、准确、灵敏的确定葡萄苗木以及田间葡萄病样中的葡萄溃疡病菌和葡萄蔓枯病菌，为苗木带菌检测和针对性防治这2类病原菌引起的葡萄枝干病害提供依据。

技术领域

本发明属于植物真菌病原物分子检测新技术，具体涉及采用双重PCR技术检测葡萄溃疡病菌和葡萄蔓枯病菌的方法的建立及双重PCR引物组合物及其应用。

背景技术

近年来，葡萄枝干病害在我国发生日趋普遍，调查结果显示，到目前为止葡萄枝干病害在我国辽宁、山东、浙江、广西等18个省市均有发生，并在部分省份的果园中造成了极为严重的损失。我国的葡萄枝干病害主要有葡萄溃疡病菌和葡萄蔓枯病，目前已知引起我国葡萄溃疡病有6种(Li X H,Yan J Y,Kong F F,et al.Botryosphaeriadothideacausing canker of grapevine newly reported in China.Plant Pathology.2010,59(6):1170.Yan J Y,Peng Y L,Xie Y,et al.First Report of Grapevine Trunk DiseaseCaused by Botryosphaeriaobtusa in China.Plant Disease.2011,95(5):616.Yan J Y,Li X H,Kong F F,et al.Occurrence of Grapevine Trunk Disease Caused byBotryosphaeriarhodina in China.Plant Disease.2011,95(2):219.Yan J Y,Xie Y,Zhang W,et al.Species of Botryosphaeriaceae involved in grapevine dieback inChina.Fungal Diverisity.2013,61:221-236.Dissanayake A J,Zhang W,Liu M,et al.Lasiodiplodiapseudotheobromae causes pedicel and pedunclediscolouration ofgrapes in China.Australasian Plant Disease Notes.2015,10(1):1-5.Dissanayake AJ,Zhang W,Li Xinghong,et al.First report of Neofusicoccummangiferaeassociated with grapevinedieback in China.PhytopathologiaMediterranea.2015,54(2):414-419.)，其中小新壳梭孢(Neofusicoccum parvum)、可可毛色二孢(Lasiodiplodiatheobromae)和葡萄座腔菌(Botryosphaeria dothidea)是我国的优势种群。我国葡萄蔓枯病的病原菌种类有4种，分别是Diaportheeres,Diaporthehongkongensis,Diaporthephaseolorum和Diaporthesojae(Dissanayake A J,Liu M,Zhang W,etal.Morphological and molecular characterizationof Diaporthe speciesassociated with grapevinetrunk disease in China.Fungal Biology.2015,119:283-294.)。在实际生产中，葡萄溃疡病菌和葡萄蔓枯病菌在田间常发生复合侵染，因此为了能够有针对性的防控葡萄溃疡病和葡萄蔓枯病，开发准确的早期诊断技术十分必要。

发明内容