[发明专利]一种沉默T细胞抗原受体的T淋巴细胞的制备方法有效
| 申请号： | 201710045150.8 | 申请日： | 2017-01-20 |
| 公开（公告）号： | CN107058230B | 公开（公告）日： | 2020-03-24 |
| 发明（设计）人： | 刘明录;金海峰;强邦明;万磊;韩庆梅;冯建海;张传鹏;马洪华 | 申请（专利权）人： | 山东兴瑞生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N5/0783;C12N15/867;C12N15/113;A61K48/00;A61K35/17;A61P35/00 |
| 代理公司： | 济南诚智商标专利事务所有限公司 37105 | 代理人： | 杨筠 |
| 地址： | 261500 山东*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 沉默 细胞 抗原 受体 淋巴细胞 制备 方法 | ||
1.一种沉默T细胞抗原受体的T细胞制备方法，其特征在于：在TCR的α链和β链基因中分别选取连续的21个核苷酸，并与相应的启动子序列依次连接起来，得到转录形成TCR-RNAi的融合基因片段，将所构建的融合基因片段插入慢病毒表达载体，包装成携带TCR-RNAi融合基因的慢病毒，将所述携带TCR-RNAi融合基因的慢病毒感染单核细胞诱导的异质T淋巴细胞，得到沉默T细胞抗原受体的T淋巴细胞；所述的转录TCR-RNAi的融合基因片段为序列表SEQ.ID.NO.1所示的核苷酸序列。
2.如权利要求1所述的一种沉默T细胞抗原受体的T细胞的制备方法，其特征在于，所述单核细胞诱导的异质T淋巴细胞如下制备：取脐带血，分离单核细胞，用含有重组干扰素的培养基诱导培养24小时后，加入重组白细胞介素、OKT-3和5％的患者自体血浆诱导继续培养24小时；每隔三天倍比加液，培养至第17天，流式细胞术检测CIK细胞的分子标记TCR+的阳性表达率；当TCR+阳性率>90％，收获由单核细胞诱导的异质T淋巴细胞。
3.如权利要求1所述的一种沉默T细胞抗原受体的T细胞的制备方法，其特征在于，将所述携带TCR-RNAi融合基因的慢病毒感染单核细胞诱导的异质T淋巴细胞如下制备：所述携带TCR-RNAi融合基因的慢病毒转染293T细胞后，所述293T细胞释放慢病毒颗粒，所述慢病毒颗粒感染单核细胞诱导的异质T淋巴细胞。
4.如权利要求1所述的一种沉默T细胞抗原受体的T淋巴细胞的制备方法，其特征在于，所述转录TCR-RNAi融合基因片段如下制取：通过基因合成技术将选取的TCR中的α链和β链的21个核苷酸，H1启动子，U6启动子与酶切位点的核苷酸序列构成融合基因TCR-RNAi。
5.一种治疗肿瘤可以异体回输的药物，其特征在于：含有权利要求1所述的沉默T细胞抗原受体的T细胞。
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