[发明专利]多重免疫荧光检测小鼠六种病毒的引物组、试剂盒及方法

权利要求书

1.用于多重免疫荧光检测小鼠TMEV、MHV、MNV、Reo-3、MVM、MPV病毒的引物组，包括7对引物，所述7对引物是通过对7对原始引物进行修饰而成；所述修饰为每对原始引物中的一条原始上游引物的5’端与对应的tag序列的3’端通过间臂连接，另一条原始下游引物的5’端添加生物素标记；

所述的原始引物对如下：

TMEV原始上游引物：5’-GATCTAAGTYAACCGACTCC-3’，

TMEV原始下游引物：5’-GAAGGAAGGGGCAACACATA-3’，

MHV原始上游引物：5’-TGGMATCCTCAAGAAGACCACTT-3’，

MHV原始下游引物：5’-ATGCCMGAAAACCARGAGTAATG-3’，

MNV原始上游引物：5’-TCTGTYCTGCGCTGGGTGC-3’，

MNV原始下游引物：5’-GCTGCGCCATCACTCATCC-3’，

Reo-3原始上游引物：5’-CCTCGCCTACGTGAAGAAGT-3’，

Reo-3原始下游引物：5’-CATCATCGAGTCCCTGGGTG-3’，

MVM原始上游引物：5’-TTGTTCCACCACCACTAAATG-3’，

MVM原始下游引物：5’-GGTTTGTGTTCAAGATCTAGTTC-3’，

MPV原始上游引物：5’-CACCAGCAACAGACAACCAA-3’，

MPV原始下游引物：5’-TGAATGCGTTGAGTGTTCTC-3’，

内标MS2原始上游引物：5’-CGCAGAATCGCAAATACAC-3’，

内标MS2原始下游引物：5’-TAACAATAAGCTCGCAGTCG-3’；

所述的tag序列如下：

TMEV的tag序列为：5’-TTAAACAATCTACTATTCAATCAC-3’，

MHV的tag序列为：5’-CACTTAATTCATTCTAAATCTATC-3’，

MNV的tag序列为：5’-TACTTCTTTACTACAATTTACAAC-3’，

Reo3的tag序列为：5’-CACTACACATTTATCATAACAAAT-3’，

MVM的tag序列为：5’-TACTACTTCTATAACTCACTTAAA-3’，

MPV的tag序列为：5’-ACTTATTTCTTCACTACTATATCA-3’，

内标MS2的tag序列为：5’-ATTAAACAACTCTTAACTACACAA-3’。

2.根据权利要求1所述的引物组，其特征在于：所述间臂为12～18个碳原子的引物中间修饰物。

3.根据权利要求2所述的引物组，其特征在于：所述间臂为六乙二醇间臂。

4.用于多重免疫荧光检测小鼠TMEV、MHV、MNV、Reo-3、MVM、MPV病毒的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒含有权利要求1所述的引物组、7种编码不同荧光色的荧光编码微球，所述的独立荧光编码微球含有与权利要求1引物中tag序列互补配对的anti-tag序列。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于：还含有链霉亲和素-藻红蛋白复合物、RT-PCR扩增试剂、内标MS2标准品、混合阳性对照、阴性对照，所述混合阳性对照为同时含有TMEV、MHV、MNV、Reo-3、MVM、MPV六种病毒的核酸样品；所述阴性对照为不含有TMEV、MHV、MNV、Reo-3、MVM、MPV六种病毒的核酸样品。