[发明专利]检测培养基中钠、钾离子浓度的方法

说明书

本发明提出了一种检测培养基中钠、钾离子浓度的方法，该方法包括：将培养基进行超滤截留处理；将超滤截留处理后产物进行高效液相色谱‑蒸发光散色分析，以便获得色谱图；以及基于高效液相色谱‑蒸发光散色分析结果，确定待测培养基中钠、钾离子的浓度。利用根据本发明实施例的检测方法，钠钾分离度好，钠、钾离子定量限既满足了样品检测的需求，又实现了对养基中钠钾离子浓度的高效、快速检测，有效控制了检测成本，适于工业生产的需求。

技术领域

本发明涉及生物检测领域，具体的，本发明涉及检测培养基中钠、钾离子浓度的方法。

背景技术

在生物制药领域，无血清培养基被广泛的应用于培养哺乳动物以制备单克隆抗体，疫苗和重组蛋白等。无血清培养基与含血清培养基比较具有独特的优势，具体体现在以下几个方面：可避免血清批次间的质量变动，提高细胞培养和实验结果的重复性；避免血清对细胞的毒性作用和血清源性污染；避免血清组分对实验研究的影响；有利于体外培养细胞的分化；可提高产品的表达水平并使细胞产品易于纯化。

采用无血清培养基进行工业化生产，细胞发酵条件对产品的质量有很大影响，其中培养基中的无机盐有助于保持细胞的渗透平衡，通过提供钠、钾和钙离子调节膜电位。

然而，如何快速检测培养基中钠、钾离子的浓度，又能有效控制检测成本，以适应工业生产的需求，是一线科研工作者拭待解决的问题。

发明内容

本申请是基于发明人对以下问题和事实的发现而提出的：

从现有技术来看，可以采用原子吸收光谱法检测酵母发酵液中钠钾含量，原子吸收光谱法是基于气态的基态原子外层电子对紫外光和可见光范围的相对应院子共振辐射线的吸收强度来定量被测元素含量为基础的分析方法，但本方法的局限性在于不能进行多元素分析，每一种元素需要配备不同光源，光源成本费用高，因测量精度高，需将样品进行多个数量级稀释，对大批量检测不便；而在医学检测中，常使用酶法和离子选择电极法测定钠钾离子的浓度，酶法测定钠钾原理为：β-半乳糖苷酶动力学法测定钠，丙酮酸激酶动力学法测定钾，常使用生化分析仪进行检测，该法对仪器有一定要求，每次测定前要先定标通过后方可检测，且检测试剂昂贵；离子选择电极法需要专用仪器和电极，且仪器泵管寿命短加上电极价格昂贵，培养基中成分是否对其造成干扰，还缺乏有效依据。

基于对现有技术问题的认识，本申请的发明人将高效液相色谱-蒸发光散射检测技术成功应用到培养基中钠钾离子浓度的检测中，实现了对养基中钠钾离子浓度的高效、快速检测，有效控制了检测成本，适于工业生产的需求。

在本发明的第一方面，本发明提出了一种检测培养基中钠、钾离子浓度的方法。根据本发明的实施例，所述方法包括：将培养基进行超滤截留处理；将超滤截留处理后产物进行高效液相色谱-蒸发光散色分析，以便获得色谱图；以及基于高效液相色谱-蒸发光散色分析结果，确定待测培养基中钠、钾离子的浓度。利用根据本发明实施例的检测方法，钠钾分离度好，钠、钾离子定量限既满足了样品检测的需求，又实现了对养基中钠钾离子浓度的高效、快速检测，有效控制了检测成本，适于工业生产的需求。

根据本发明的实施例，所述检测培养基中钠、钾离子浓度的方法还可以进一步具有如下附加技术特征至少之一：

根据本发明的实施例，所述超滤截留是通过如下方式进行的：1)将待测培养基进行第一离心处理；2)将第一离心处理后上清加入超滤管中，所述超滤管的截留量为30kD；3)将所述超滤管进行第二离心处理，以便获得滤下液，所述第二离心处理是在转速为7000rpm的条件下离心5min，所述滤下液为所述超滤截留处理后产物。发明人在实验中发现，采用上述的超滤截留处理培养基，不仅可以有效去除待测培养基中细胞及其碎片，减少胞内金属离子对检测结果的影响，避免样品中蛋白大分子物质堵塞色谱柱，又可以有效控制处理后样品的酸性强度，减少样品对阳离子色谱分离的影响，以控制平行处理样品的信号差异。