[发明专利]一种利用抑菌培养基培育割手密的组培方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种植物组织培养方法，具体涉及一种利用抑菌培养基培育割手密的组培方法，属生物技术领域。

背景技术

割手密(Saccharum spontaneum L.)，又名甜根子草、小巴茅，为禾本科甘蔗属多年生的草本植物，具有抗逆性强、适应性广、分蘖多等优良特性，主要分布在热带、亚热带两大气候区，在我国南自海南岛，北至秦岭，东起台湾东部，西至西藏的雅鲁藏布江均有分布。割手密在甘蔗属中种类丰富，且含有较高糖分，是甘蔗属中最早用于甘蔗杂交育种的种质资源，也是最有应用价值的野生种质资源，在甘蔗育种中具有重要的地位和作用。国内外甘蔗育种专家利用割手密的优质基因对栽培蔗遗传基因进行改良，先后培育出了多个优良的甘蔗栽培品种，在生产上得到推广应用。

虽然利用割手密与栽培甘蔗进行有性杂交，进而育成新的甘蔗品种，是甘蔗育种中的一种有效的途径，然而在实际生产中却面临各种问题，尤其是花期不遇甚至不开花成了它们进行有性杂交的严重障碍。科研工作者通过多年研究发现，利用体细胞杂交可以克服这个障碍，然而在进行体细胞杂交过程中，外植体培养、获得愈伤组织、再分化成苗等是不可缺少的组培环节。

割手密组织培养的成本主要包括组培苗生产所需的培养基、设施设备、供电成本、耗材和人工成本。常规的割手密组织培养方法要求外植体接种在高温高压灭菌后的无菌培养基中才能正常生长，耗能大，人工操作成本高。如果能通过抑菌的方法来改造培养基，使培养基在不需要进行高温高压灭菌，就能够使割手密正常生长。这样，一方面可以降低割手密组织培养对设施设备的要求，尤其不需要高温高压灭菌所需配置的高压锅设备，缩减了投资成本，电能消耗也将大幅度降低；另一方面，采用这种培养基开展割手密组织培养，组培环节大为简化，人工操作的速度大幅提高，从而降低了人工成本。此外，由于改造后的培养基自身具有杀菌、抗菌或抑菌作用，能有效控制组织培养过程中的污染问题，又不会对割手密生长产生毒害或抑制，即不影响割手密的正常生长，从根本上简化了割手密组织培养。

发明内容

本发明的目的是提供一种利用抑菌培养基培育割手密的组培方法。

本发明的目的是通过以下方法实现的。

本发明的一种利用抑菌培养基培育割手密的组培方法，包括培养容器消毒、培养基配制、无菌水制备、诱导培养、分化及增殖培养、生根培养和瓶苗移栽，其特征在于：

1.培养容器消毒：将培养瓶、瓶盖及接种用的塑料盘在100mg/L次氯酸钠+10mg/L环丝氨酸+0.5mg/L十二烷基磺酸钠的水溶液中浸泡不少于10h，保存备用；

2.培养基配制：诱导培养基为MS+1～5mg/L 2,4-D+40～100mg/L次氯酸钠+0.5～2.0mg/L环丝氨酸+10～50mg/L特美汀+10～50mg/L丙酸钙+0.05～0.2mg/L十二烷基磺酸钠+30g/L蔗糖+3.0g/L琼脂粉，pH5.8；分化及增殖培养基为：MS+0.5～2mg/L IAA+0.5～2mg/L KT+40～100mg/L次氯酸钠+0.5～2.0mg/L环丝氨酸+10～50mg/L特美汀+10～50mg/L丙酸钙+0.05～0.2mg/L十二烷基磺酸钠+30g/L蔗糖+3.0g/L琼脂粉，pH5.8；生根培养基为1/2MS+2～5mg/L NAA+40～100mg/L次氯酸钠+0.5～2.0mg/L环丝氨酸+10～50mg/L特美汀+10～50mg/L丙酸钙+0.05～0.2mg/L十二烷基磺酸钠+30g/L蔗糖+3.0g/L琼脂粉，pH5.8；所述MS，为1962年，Murashige和Skoog公开的MS培养基；所述2,4-D，指2,4-二氯苯氧乙酸；所述IAA，指吲哚乙酸；所述KT，指6-糠氨基嘌呤；所述NAA，指α-萘乙酸；配制培养基时，先称各培养基配方中的蔗糖和琼脂粉，加培养基总重量1/2的自来水，加热至琼脂粉完全溶解，再按各培养基配方配齐其他原料后，定容，然后用1mol/L的NaOH或1mol/L的HCl调pH值至5.8，分装到消毒过的培养容器中，封口，冷却凝固，备用；

3.无菌水的制备：采用次氯酸钠、环丝氨酸、十二烷基磺酸钠和水配制无菌水，终浓度为100mg/L次氯酸钠、10mg/L环丝氨酸、0.5mg/L十二烷基磺酸钠，现配现用；