[发明专利]一种适用于硫酸奈替米星注射液有关物质的检测方法

说明书

本发明提供一种适用于硫酸奈替米星注射液有关物质的检查方法，方法采用两种离子对溶液进行梯度洗脱，经脉冲安培电化学检测器检测，同时兼顾极性较大的大部分杂质与极性更大的小部分杂质，分离能力更强，灵敏度更高，线性范围更宽，专属性好，重复性优。

技术领域

本发明涉及药物分析领域，具体提供一种适用于硫酸奈替米星注射液有关物质检测的脉冲安培电化学检测方法(PED)。

背景技术

奈替米星是一类半合成氨基糖苷类抗生素，从结构上分析是西索米星1-N-乙基衍生物，又称为乙基西索米星。奈替米星的抗菌谱广，对革兰阴性菌以及部分革兰阳性菌均有较强的抗菌活性。奈替米星对耐庆大霉素、西索米星、妥布霉素的菌群仍有抗菌活性，且其耳肾毒性低于以上氨基糖苷类抗生素，临床应用为其硫酸盐。

奈替米星在结构上保留了西索米星中的一个双键，在低波长区有较弱的紫外吸收，现行美国药典中采用高效液相紫外检测器(HPLC-UV)直接检测有关物质，但存在灵敏度低和无紫外吸收的主要降解杂质1-N-乙基加洛糖胺不能被检出现象。众多文献报道通过丹磺酰氯、邻苯二甲醛(OPA)等柱前或柱后衍生后采用荧光或紫外检测，灵敏度低，耗时费力，实验影响因素多，结果重复性差。2015版《中国药典》(ChP.2015)采用ELSD检测其有关物质，但是存在灵敏度低、分离能力差、色谱条件优化空间小等问题。EP9.0收载PED法灵敏度较高，但是流动相中含有大量的盐，色谱柱平衡困难，使用寿命短，分离也较差。

脉冲安培电化学检测器(PED)具有灵敏度高、重复性好、线性范围宽、色谱条件优化空间大等优点，对于UV无法检测的具有电活性的化合物可直接检测，无需对样品进行复杂的衍生化处理，且灵敏度高于蒸发光散射检测器(ELSD)与电喷雾检测器(CAD)，是UV、ELSD、CAD等检测器强有力的补充。

基于目前检查硫酸奈替米注射液有关物质现行方法所存在的问题，迫切需要一种更为准确、有效的新方法，本发明新建的PED法条件简单、分离能力更强，灵敏度更高，线性范围更宽，专属性好，重复性优，最能区分不同品质的硫酸奈替米星注射液，更加适用于硫酸奈替米星注射液有关物质的检测。

发明内容

本发明提供一种适用于硫酸奈替米星注射液有关物质检查的脉冲安培电化学检测法(PED)。

溶液的配制

对照品储备液 精密称取奈替米星对照品适量，用流动相A(MPA)溶解并稀释制成含奈替米星0.25mg/ml的溶液作为对照品储备液。

供试品溶液 移取硫酸奈替米星注射液1.00ml至20ml容量瓶中，用MPA稀释至刻度、摇匀，移取1.00ml至10ml容量瓶中用MPA稀释至刻度、摇匀，制成含奈替米星0.25mg/ml的溶液作为供试品溶液。

对照溶液 移取供试品溶液1.00ml至100ml容量瓶中，用MPA稀释至刻度、摇匀即得。

流动相A(MPA)：1.5％三氟乙酸溶液(含有0.5％的50％NaOH溶液)-乙腈(97∶3)；

流动相B(MPB)：0.1％五氟丙酸溶液-乙腈(97∶3)；

色谱柱：AgilentProshell SB-C18(4.6×150mm，2.7um)或其他效能相当的耐酸系列色谱柱；

检测器：脉冲安培电化学检测器检测(Ag-AgCl参比电极；钛对电极；金工作电极，直径3mm)；

四电位检测波形：

温度：色谱柱35℃，检测器35℃；

柱后衍生液：0.8M无二氧化碳的NaOH溶液；

进样量：25μl