[发明专利]寨卡病毒、登革热病毒和基孔肯雅病毒核酸检测试剂盒及其用途

说明书

本发明公开了一种寨卡病毒、登革热病毒和基孔肯雅病毒核酸检测试剂盒及其用途，所述试剂盒包括以下各组分：RT‑PCR反应液、酶混合液、寨卡病毒/登革热病毒/基孔肯雅病毒/内标基因四重反应液、阳性对照和空白对照。本发明寨卡病毒、登革热病毒和基孔肯雅病毒检测试剂盒能够在同一反应管中同时检测出寨卡病毒、登革热病毒和基孔肯雅病毒，解决了现有体外检测试剂盒无法在同一反应管中同时检测寨卡病毒、登革热病毒和基孔肯雅病毒的问题。此外，本发明检测试剂盒还具有特异性强、灵敏度高，操作简便、可重复性强、检测结果快速客观等优点，本发明的提出为寨卡病毒、登革热病毒和基孔肯雅病毒的体外检测提供了一种有效的技术手段。

技术领域

本发明涉及一种蚊媒传播病原体的体外诊断试剂盒，尤其涉及寨卡病毒、登革热病毒和基孔肯雅病毒核酸检测试剂盒及其用途，属于病毒的体外诊断技术领域。

背景技术

寨卡病毒(Zika Virus，ZIKV)属黄病毒科(Flaviviridae)黄病毒属(Flavivirus)，呈球形，直径约为40～70nm，有包膜，基因组为单股正链RNA，长度约为10.8kb，基因组包括5′和3′端非编码区，中间为单一的开放读码框，其编码多肽链可切割成熟为3个结构蛋白以及7个非结构蛋白(NS1、NS2A、NS2B、NS3、NS4A、NS4B和NS5)，结构蛋白为衣壳蛋白(capsid，C)、膜蛋白前体/膜蛋白(Premembrane/membrane，prM)和包膜蛋白(Envelope，E)。

寨卡病毒于1947年首先在乌干达维多利亚河寨卡森林中的猴血清中分离，1948年在同一地区的非洲伊蚊中也分离到ZIKV，之后，相继在亚洲和非洲的人和多种蚊媒中分离到ZIKV，根据NS5基因进行的遗传进化分析显示ZIKV可分为亚洲型和非洲型。ZIKV可在C6/36、Vero等细胞中培养繁殖并产生病变，与同属黄病毒属的登革病毒、黄热病毒及西尼罗病毒等存在较强的血清学交叉反应。ZIKV感染引起人类疾病的剂量尚不清楚，与传播途径有关。经蚊叮咬传播感染的剂量一般为10³～10⁵pfu。其抵抗力尚不详，但黄病毒属病毒一般不耐酸、不耐热，60℃30min可灭活，70％乙醇、1％次氯酸钠、脂溶剂、过氧乙酸等消毒剂及紫外照射均可灭活。

采用生物信息学技术对ZIKV基因组进行分析显示，病毒可能出现于1892-1943年之间，约为1920年，在1940年前后分2次在非洲地区扩散，形成非洲型的2个基因亚型，1945年扩散至马来西亚，1960年扩散至密克罗尼西亚，形成亚洲型。

在亚洲地区，马来西亚、巴基斯坦、柬埔寨、泰国、印度尼西亚曾在本土分离到ZIKV。在太平洋岛国，2007年雅浦岛发生首次寨卡病毒病暴发疫情，毒株起源于东南亚地区。雅浦岛地理位置与印度尼西亚和马来西亚临近，虽有报道在风力的作用下，蚊媒可以跨过几百公里的洋面，但疫情的输入更可能是由于旅游、贸易活动使处于病毒血症期的人、宿主动物或感染病毒的蚊媒输入而造成的。2013年10月7日至2014年4月6日，法属波利尼西亚发生较大规模暴发流行，估计发病人数达32 000例，同时发现部分病毒感染者出现神经症状或自身免疫综合征。

登革热病毒(Dengue virus)属黄病毒科黄病毒属，为单正链RNA病毒，根据包膜蛋白E抗原性不同分为4个血清型。主要通过埃及伊蚊和白纹伊蚊传播，引起登革热、登革出血热和登革休克综合征，登革病毒感染后，潜伏期为3～14天，通常4～7天。主要分布在热带和亚热带，影响到全球100多个国家和地区，有25亿人生活在受威胁地区。