[发明专利]一种检测慢性乙肝或HBV携带者是否为肝癌易感人群的试剂盒及方法

说明书

本发明提供一种检测慢性乙肝或HBV携带者是否为肝癌易感人群的试剂盒及方法，涉及生物检测领域，包括用于扩增样本中含有SNP位点的DNA的特异性引物的扩增反应液；包括用于纯化所述DNA的SAP酶的纯化反应液；用于得到IRF3启动子中的rs2304204位点的碱基检测结果的单碱基延伸引物的延伸反应液，当得到所述IRF3启动子中的rs2304204位点的检测结果表现为GG基因型时，则判断慢性乙肝或HBV携带者为肝癌易感人群。本发明提供的特异性引物及延伸引物灵敏度高，特异性好，本发明提供的方法可以预测慢性乙肝或HBV携带者是否为肝癌易感人群，操作简单，有利于预后目标的监测。

技术领域

本发明涉及医疗卫生领域，尤其涉及一种检测慢性乙肝或HBV携带者是否为肝癌易感人群的试剂盒及方法。

背景技术

目前，乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)感染是世界性公共卫生问题。据世界卫生组织统计表明，全世界有4亿HBV感染者，而中国的HBV携带者就占全世界的1/3。其中，10％的成年人和约80％-90％的儿童感染后会发展为慢乙肝，而慢乙肝患者死于慢乙肝并发的肝硬化、原发性肝细胞癌的占有很大一部分，这种现象是由多因素及各种因素相互作用决定的，影响HBV感染结局的因素有病毒方面的因素，(如病毒基因型、病毒载量及病毒变异情况)；宿主免疫状态(如感染时年龄、是否有其他病毒合并感染)和宿主的遗传因素。尤其是，宿主抗病毒免疫相关基因的多态性在很大程度上决定了HBV感染后的临床结局。

IRF3(interferon regulatory factor 3)基因位于19号染色体，编码50KD的蛋白质产物。IRF3是IRF家族中的成员，在调节干扰素表达中起重要作用。IRF3是MyD88非依赖信号转导途径中的重要信号分子，细胞普遍表达IRF3，当病毒感染细胞，IRF3识别双链RNA分子，并被激活。IRF3的激活可以调节下游IFN-β的表达水平，而IFN-β是体内抗病毒反应的重要细胞因子。有研究表明病毒进入细胞并激活抗病毒反应是IRF3介导的，它在机体天然免疫对病毒感染的反应中起重要作用。很多研究表明IRF3与疾病相关。IRF3第5内含子的A/T多态性影响IFN-β1的表达。研究发现HBV慢性感染的患者不能激活IRF3，产生足够多的IFN-β来清除乙肝病毒，从而导致了乙肝病毒的持续感染状态。但是，目前的研究并没有给出利用IRF3启动子序列上的某个位点对HBV感染的中国汉族人群的进行临床结局判断的研究与启示。

发明内容

为了在感染初期提早发现，协助治疗患者，避免肝病进程加速转为严重肝病甚至肝癌，本发明提供一种检测慢性乙肝或HBV携带者是否为肝癌易感人群的试剂盒和方法，该方法主要依赖于IRF3启动子中的rs2304204位点作为肝癌易感基因的位点，用于检测慢性乙肝或HBV携带者是否为肝癌易感人群。本发明方法操作简单，有利于预后目标的监测。

为实现本发明的目的，本发明第一方面提供一种检测慢性乙肝或HBV携带者是否为肝癌易感人群的试剂盒，其特征在于，包括：

包括用于扩增样本中含有SNP位点的DNA的特异性引物的扩增反应液；

包括用于纯化所述DNA的SAP酶的纯化反应液；

用于得到IRF3启动子中的rs2304204位点的碱基检测结果的单碱基延伸引物的延伸反应液。

其中，当得到所述IRF3启动子中的rs2304204位点的检测结果表现为GG基因型时，则判断慢性乙肝或HBV携带者为肝癌易感人群。

特别是，所述IRF3启动子中的rs2304204位点的检测包括：

利用特异性引物和PCR扩增反应液对样本扩增出含有SNP位点的一段DNA，并使用SAP酶去除掉PCR体系中剩余的脱氧核糖核苷三磷酸和引物，得到样本DNA片段；

向加入单碱基延伸引物，并采用单碱基延伸终止反应液对样本DNA进行单碱基延伸终止反应，得到用于SNP分析的目的基因；