[发明专利]FOXC1基因H446HG突变体及其应用

说明书

FOXC1基因H446HG突变体及其应用，所述突变位于第446个氨基酸组氨酸之后插入一个甘氨酸，该突变可用于制备儿童急性淋巴细胞白血病筛查试剂盒。本发明首次从遗传学角度筛选与儿童急性淋巴细胞白血病发生相关的T细胞突变，从分子水平为儿童急性淋巴细胞白血病早期筛查提供了新的方向，提供FOXC1基因H446HG突变在制备儿童急性淋巴细胞白血病筛查试剂盒中的应用，具有重大的实用价值和应用前景。

技术领域：

本发明属于分子生物学基因检测技术领域，具体涉及FOXC1基因H446HG突变体及其在儿童急性淋巴细胞白血病筛查试剂盒中的应用。

背景技术：

急性白血病是危害儿童健康的重大疾病之一，为造血干细胞在分化过程中于某一阶段出现阻滞的一种恶性增殖疾病，其中急性淋巴细胞性白血病(Acute LymphoblasticLeukemia,ALL)更是儿童最常见的恶性血液病，约占白血病的75％。随着儿童ALL诊断与治疗方案的不断完善，多种药物联合治疗、支持治疗及造血干细胞移植的应用，其5年无病生存率已超过80-90％，成为一种可以治愈的恶性肿瘤。但是，仍然有相当部分的ALL病人因治疗无效或复发而死亡。

化学因素、放射因素、遗传因素及免疫因素等在白血病的发病中发挥着重要作用，其中免疫系统在肿瘤的发生发展过程中扮演了非常复杂的角色，ALL患儿免疫功能紊乱是其发生难治复发和死亡率较高的一个重要原因之一。研究者已经发现，T细胞免疫及其调节网络异常是ALL发病和转归过程中的一个重要参与因素。炎症以及肿瘤使得环境中的抑制型调节性T细胞数量(RegμLatory T cells,Treg)大大增加,Treg会分泌大量抑制型细胞因子(TGF，IL10等)来抑制免疫反应。研究显示，Treg细胞亚群在多种血液系统恶性疾病包括ALL患儿中的比例较正常人显著升高，同时，Treg在ALL患儿中的异常分布也被鉴定与患者预后较差密切相关。在白血病的发生发展过程中，Treg可以通过分泌CD25抑制IL-2依赖的其他效应T细胞(Effector T cell,Teff)的抗肿瘤效应。而在针对白血病的免疫治疗中，由特异性白血病细胞负载的DC-CIK治疗后，ALL患者外周中Treg分布明显下降。虽然针对Treg在儿童ALL发生发展中的免疫抑制效应及促瘤作用已逐渐被研究者所阐明，但在儿童ALL的发生过程中促进Treg分化增加的具体调控机制仍不明确。

遗传因素及环境因素在儿童ALL的发生中具有重要的联系，本课题组也已筛选出一系列在环境诱导的儿童ALL发生中具有潜在患病风险的特异性突变位点以及单核苷酸多态性位点，揭示遗传因素在儿童ALL发病中的重要作用。而在针对儿童ALL发病过程中Treg分化增加的机制研究中，已有研究者发现在T细胞分化过程中，基因组特异性基因产生的突变会导致T细胞异常分化。但目前为止，从遗传学角度探索儿童ALL发病过程中Treg分布异常增加的调控机制尚未见报道。因此，深入研究儿童ALL的发病机制，可以为发现新的生物学标志及新的靶向治疗位点提供坚实的理论基础，也可以为儿童ALL提供新的诊断和治疗依据。

发明内容：

解决的技术问题：本发明的目的在于针对T细胞中是否存在相关突变与儿童ALL发生相关的问题，提供一种FOXC1基因H446HG突变体及其应用，通过全外显子测序技术对比分析ALL患儿T细胞突变和正常对照T细胞突变，筛选出ALL特异性的T细胞突变，为临床上儿童ALL患者的早期诊断提供新的方法。

技术方案：FOXC1基因H446HG突变体，所述突变位于第446个氨基酸组氨酸之后插入一个甘氨酸，其氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。

FOXC1基因H446HG突变体，所述突变位于1337位之后插入了核苷酸CGG(c.1337A>ACGG)，其核酸序列如SEQ ID NO.4所示。

上述突变体在制备儿童急性淋巴细胞白血病筛查试剂盒中的应用。