[发明专利]一种具有促进疫苗免疫反应的法氏囊活性九肽及其应用

说明书

本发明涉及一种具有促进疫苗免疫反应的法氏囊活性九肽。本发明所述的免疫活性肽是一种来源于法氏囊的小分子多肽，氨基酸组成为Leu Met Thr Phe Arg Asn Glu Gly Thr，结构简单，免疫原性极弱。本发明活性肽具有促进疫苗免疫反应的功能，对小鼠具有刺激抗体产生、细胞免疫反应、淋巴细胞活力增强和提高疫苗免疫效力作用。本发明可作为疫苗佐剂或免疫增强剂应用于动物疫苗应用研究，以提高动物机体针对特异抗原的免疫应答能力，提高疫苗的免疫效力，从而提高动物机体抗疫病感染的能力，可应用于基础免疫研究、临床应用研究等领域。

技术领域

本发明属于兽医生物制品技术领域，具体涉及一种具有促进疫苗免疫反应的法氏囊活性九肽及其应用。

背景技术

日本乙型脑炎(Japaneses encephalitis，简称乙脑)是由乙型脑炎病毒(Japanneses encephalitis virus,JEV)引起的一种危害严重的人畜共患传染病，临床上以高热、意识障碍、抽搐及脑膜刺激症为特征，严重者出现中枢性呼吸衰竭。乙脑病死率高，即使治愈也常伴有后遗症。乙脑病毒的传播主要呈现：猪-蚊-人模式，猪是重要的病毒扩增宿主，人是终末宿主，而蚊子是关键的传播媒介。目前控制乙脑的主要手段是宿主接种疫苗。随着全球气候变暖和人口流动性增大引起的蚊媒传染病发病率上升，JEV的防控策略显得越来越紧迫。因此如何诱导机体产生有效持久的免疫保护应答是相关科研工作人员迫切需要解决的现实问题。

疫苗免疫不仅是当前畜禽传染病防制的主要措施。临床上使用的大多数疫苗配合佐剂才能发挥良好的功效。因而，安全、无残留、有效的新型免疫增强剂研究及技术创新已成为我国动物疫病防控规划的重要举措。

发明内容

本发明的目的在于提供一种价格低、安全、无残留的高效促进疫苗免疫效果的新型活性肽，可作为疫苗佐剂或免疫增强剂应用于动物疫苗应用研究，以提高动物机体针对特异抗原的免疫应答能力，提高疫苗的免疫效力，从而提高动物机体抗疫病感染的能力，可应用于基础免疫研究、临床应用研究等领域。

一种法氏囊多肽BP9，其氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，为：5’-Leu Met Thr PheArg Asn Glu Gly Thr-3’。

本发明所述法氏囊多肽BP9在制备免疫药物中的应用，优选的在制备畜禽免疫药物中的应用，特别优选的，在制备预防乙型脑炎药物中的应用。

一种预防乙型脑炎的免疫组合物，包含乙型脑炎及所述的法氏囊多肽BP9。

所述法氏囊多肽BP9优选以2～255μg/mL计量存在于免疫组合物中，更优选10～250μg/mL，进一步优选10～50μg/mL，最优选为10μg/mL。

本发明通过超滤浓缩技术，回收分子量1000Da以下的有效成分(即粗提物)。经真空干燥，再次浓缩，溶解后，用反向高效液相色谱(RP-HPLC)分离、纯化多种法氏囊中的活性成分。经MODIL-TOF质谱分析，测定该法氏囊活性肽的分子量为1068.22(m/z)，并获得完整的氨基酸序列，即LMTFRNEGT(即5’-Leu Met Thr Phe Arg Asn Glu Gly Thr-3’，序列1)，并命名为法氏囊多肽(BP9)。在小鼠免疫中，添加0.01mg/mL和0.05mg/mL剂量BP9的实验组JEV疫苗免疫效力显著高于未加该组分的疫苗对照组。

1.法氏囊多肽BP9的制备

利用超滤浓缩和分子筛技术，回收分子量小于1KDa的法氏囊粗提物，经真空冷冻干燥，超纯水稀释后用反向高效液相色谱(RP-HPLC)分离，收获特定洗脱峰值的法氏囊多肽成分。通过刺激杂交瘤细胞，能够抗体水平升高的组分经MODIL-TOF质谱分析，测定该法氏囊活性肽的分子量为1068.22(m/z)，并获得该法氏囊多肽的完整氨基酸序列，即LMTFRNEGT。通过人工合成BP9，以一定浓度进行验证实验。

2.法氏囊多肽BP9促进JEV灭活疫苗实验