[发明专利]用于川崎病检测的引物组、探针及试剂盒

权利要求书

1.一种用于川崎病检测的核酸序列组合，包括反转录引物、扩增引物和探针序列，其特征在于：所述核酸序列组合能够有效定性/定量检测人血清中的hsa-miR-197、hsa-miR-671、hsa-miR-1246和hsa-miR-4436,

其中，反转录引物序列如下：

RT-miR-197：GTCGTATCCAGTGCAGGGT-探针序列-ACGACGCTGGG；

RT-miR-671：GTCGTATCCAGTGCAGGGT-探针序列-ACGACTTTTTTTTTTTCTCCAGCC；

RT-miR-1246：GTCGTATCCAGTGCAGGGT-探针序列-ACGACCCTGCT；

RT-miR-4436：GTCGTATCCAGTGCAGGGT-探针序列-ACGACGGCAGGGC；

扩增引物序列如下：

正向引物：

F-miR-4436：TCCTGTCCACTTCTGCCT；

F-miR-197：TTCACCACCTTCTCCACC；

F-miR-671：GAGAGGAAGCCCTGGAG；

F-miR-1246：GCCGAATGGATTTTTGGAG；

通用反向引物R-KD：TCGTATCCAGTGCAGGG；

探针序列如下：

CCGAGGTATTCGCACTGGAT。

2.一种用于川崎病检测的试剂盒，包括反转录试剂、扩增试剂和如权利要求1所述的探针序列，所述探针序列两端分别连接有报告基团和对应的淬灭基团，其特征在于：反转录引物序列为权利要求1所述的RT-miR-197、RT-miR-671、RT-miR-1246和RT-miR-4436；

扩增引物为权利要求1所述的R-KD、F-miR-197、F-miR-671、F-miR-1246和F-miR-4436。

3.一种检测芯片或装置，其包括权利要求1所述的反转录引物、扩增引物和探针序列。

4.权利要求1所述的反转录引物、扩增引物和探针序列在制备川崎病的预测、辅助诊断川崎病的试剂或工具中的应用。

5.权利要求1所述的核酸序列组合在制备同时定性/定量检测hsa-miR-197、hsa-miR-671、hsa-miR-1246和hsa-miR-4436试剂中的用途；其中，所述检测hsa-miR-197、hsa-miR-671、hsa-miR-1246和hsa-miR-4436的方法，包括如下步骤：

1)从样品中提取血清外泌体miRNA，加入反转录引物RT-miR-197、RT-miR-671、RT-miR-1246和RT-miR-4436进行反转录，得到cDNA；

2)以cDNA为模板，使用引物R-KD、F-miR197、F-miR-671、F-miR-1246和F-miR-4436进行扩增反应，扩增反应的同时加入探针序列，对扩增产物进行分析，判断各miRNA的荧光定量反应Ct值，即可；

其中，反转录引物、扩增引物和探针序列如权利要求1所述。

6.根据权利要求5所述的用途，其特征在于：扩增反应体系和条件如下：

PCR 2X mix：10μl

引物mix：F/R各0.4μl

探针：0.4μl

CXR：0.2μl

cDNA：2μl

ddH₂O：补足至20μl

反应条件：95℃5min；95℃15S，54℃25s，72℃15s，40个循环。