[发明专利]竹节参皂苷Ⅳa在制备治疗高脂饮食致小鼠小肠干细胞的疾病上的应用

说明书

本发明提供一种竹节参皂苷Ⅳa在制备治疗高脂饮食致小鼠小肠干细胞的疾病上的应用。具体针对抑制高脂饮食致小鼠小肠绒毛变长变粗的疾病；抑制高脂饮食致小鼠小肠隐窝处PCNA阳性细胞数量增多的疾病；抑制高脂饮食致小鼠小肠杯状细胞数量增多的疾病；抑制高脂饮食致小鼠小肠隐窝处Bmil阳性细胞数量增多的疾病；抑制高脂饮食致小鼠小肠β‑catenin细胞数量增多的疾病。

技术领域

本发明提供一种竹节参皂苷Ⅳa在制备治疗高脂饮食致小鼠小肠干细胞的疾病上的应用

背景技术

竹节参属五加科人参植物竹节干燥呈竹鞭状根茎，参具有补虚养阴、活络祛痰、活血止血、散瘀止痛等功效。现代药理研究表明，竹节参具有抗炎、抗氧化、免疫调节、保护心肌缺血、抗衰老等多种药理作用。皂苷类成分是其主要药效成分和研究最多的成分，研究表明竹节参总皂苷具有一定的降血脂作用，同时，其能够通过诱导细胞分化和周期组织抑制人白血病细胞HL-60的增殖。竹节参皂苷以齐墩果烷型皂苷为主，包括竹节参皂苷Ⅰa、Ⅰb、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅳa、Ⅴ、pjs1、pjs2、 pjs4等。

高脂饮食是肥胖症的重要诱因之一，而肥胖症作为一种慢性代谢性疾病，会导致许多慢性疾病而倍受关注。越来越多的实验和研究证明高脂饮食是许多类型肿瘤的致病因素，也有研究表明高脂饮食与肠道疾病密切相关，肥胖人群发展成为结直肠癌的风险更高。小肠是营养物质消化吸收的主要场所，黏膜柱状上皮细胞承担小肠主要的消化吸收功能，而小肠干细胞（Intestinal stem cells，ISCs）是小肠黏膜上皮细胞不断更新的源泉。小肠干细胞的增殖分化和维持自身平衡由干细胞微环境通过启动相关信号而调控，小肠干细胞所处的微环境由小肠干细胞及其周围细胞分泌的生长因子、细胞因子和细胞外基质等构成。Wnt/β-catenin信号是调节小肠干细胞微环境的主要信号，在小肠干细胞数量控制中起决定性作用。β-catenin作为Wnt/β-catenin信号的核心成分，其在细胞内水平的高低决定Wnt/β-catenin信号的传导，Wnt/β-catenin信号通过磷酸化的Disheveled蛋白将信号传至细胞内，抑制GSK-3β功能，促进β-catenin释放，进入细胞核进而启动一系列与干细胞增殖相关的基因表达。小肠干细胞具有旺盛的增殖分化功能，在异常刺激下可过度增殖分化。最新研究表明高脂饮食使得小肠干细胞的数量增加，也能够生成一群类似于干细胞的细胞，致其无限制的增殖并分化为其他类型的细胞，进而导致肠道肿瘤。

发明内容

竹节参皂苷Ⅳa（Chikusetsu Saponin Ⅳa，CSⅣa）对小肠干细胞是否有调节作用尚不清楚，本发明应用高脂饲料建立高脂饮食小鼠模型，探讨高脂饮食小鼠小肠干细胞数量及增殖分化功能的变化，并进一步研究了其微环境Wnt/β-catenin信号通路的变化及竹节参皂苷Ⅳa对上述改变的调节作用。

材料与仪器

实验动物 雌雄各半C57BL小鼠40只，购于三峡大学医学院实验动物中心，生产许可证号：SCXK（鄂）2015-0018，分笼饲养，自由饮水和摄食。

药物与试剂 竹节参皂苷Ⅳa购自成都植标化纯生物技术有限公司；一抗Bmi1，Abcam公司；PCNA，苏州睿灜生物技术有限公司；β-catenin、GSK-3β，美国 Cell Signalingtechnology公司；羊抗兔、兔抗鼠二抗，武汉科瑞生物技术有限公司；DAB试剂盒，迈新生物。

主要仪器 LEICA TP1020自动脱水机，LEICA EG1150H 石蜡包埋机，LEICAEG1150C 超薄切片机，德国Leica公司；CS-V1摊片烤片机，湖北孝感宏业医用仪器有限公司；CX41光学倒置显微镜，日本Olympus公司；JA2003 电子分析天平，上海天平仪器厂。

方法