[发明专利]采用SCoT分子标记简化箭筈豌豆品种纯度鉴定的方法

说明书

本发明属于农业牧草育种与应用技术领域，一种采用SCoT分子标记高效、科学的进行箭筈豌豆种质资源纯度鉴定的方法。一种采用SCoT分子标记简化箭筈豌豆品种纯度的鉴定方法，其主要特点在于包括如下步骤：(1)箭筈豌豆种质DNA提取；(2)采用SCoT引物对步骤(1)的箭筈豌豆种质DNA进行PCR扩增；(3)对PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳拍照；(4)比较箭筈豌豆种质多态性位点的差异，确定箭筈豌豆品种纯度鉴定结果。本发明使用的检测方法可在6h内完成种子品种纯度的鉴定工作，具有科学、高效、价廉、操作简单等优势。可为箭筈豌豆品种纯度鉴定、新品种选育、以及品种的真实性、稳定性和特异性鉴定提供有力的技术支持。

技术领域

本发明属于农业牧草育种与应用技术领域，一种采用分子标记高效、科学的进行箭筈豌豆种质资源纯度鉴定的方法。

背景技术

近年来，随着牧草种质资源的发展，牧草育种越来越受到学者重视，培育推广新的牧草品种是我国牧草育种发展的重要方向。现阶段而言，牧草育种方式主要有田间育种及分子手段育种两种方式，以分子手段育种为主；但是，因为分子育种技术的参差不齐，导致繁育的牧草种质质量良莠不齐，无法保证种质资源的纯度。因此，牧草新品种纯度的鉴定至关重要，这不仅是对新品种的保护与审定，也是区分假劣种子，维护培育者自主知识产权的重要手段。因此，研发科学、高效的牧草品种纯度鉴定方法，是高校企业重点关注的研究课题。

箭筈豌豆是一年生豆科闭花授粉牧草，广泛种植于我国西北、华北地区，具有抗寒旱性强、地域适应力广、有较高营养价值、可做高原地区青贮饲料，是我国牧草资源中品质优良的牧草作物，在我国草地农业系统中发挥重要的作用，具有广阔的育种前景。由于牧草种质资源繁多，不同种质之间的纯度差异直接影响了种质资源的使用和保护，因此对种质纯度的鉴定工作显得尤为重要，与此同时新种质资源的登记及纯度和遗传特性分析都需要比田间测试更准确、更高效、更低廉以及更简便的分子水平种质纯度的鉴定方法。

近年来，随着分子生物学和功能基因学研究的发展，功能性的分子标记愈来愈受到学者们的重视，因其本身可能含有目的基因的一部分或与目的基因紧密联锁，这样通过对某个分子标记的筛选即能对性状进行筛选，从而加快种质育种进程。现如今已经挖掘和开发出许多种分子标记方法如SNP、RAPD、SSR、ISSR和AFLP等，这些分子标记技术已经广泛应用于物种遗传多样性分析、种质资源鉴定、遗传图谱构建、QTL定位、基因定位克隆、转基因植物鉴定及分子辅助育种等方面。

SCoT分子标记，即目标起始密码子多态性(Start codon targetedpolymorphism)标记。该分子标记能够利用植物基因中的ATG翻译起始位点侧翼的序列保守性，得到所需的单个引物，并扩增对应目标基因组，进而发生显性的多态性标记，与其他分子标记相比，SCoT分子标记具有操作简便、价格低廉、重复性好、多态性丰富等优点，目前该分子标记已成功应用于老芒麦(薛德，2015)、大豆(李强，2013)、龙眼(陈虎，2010)、柑橘(韩国辉，2011)、药用菊花(赵瑞强，2009)，并在物种构建遗传图谱、特异性状标记、基因组学比较等方面得到广泛应用。但是，该分子标记技术在箭筈豌豆品种纯度鉴定方面的应用未见报道。

发明内容

本发明的目的在于避免现有技术的不足之处而提供一种采用SCoT分子标记简化箭筈豌豆品种纯度鉴定引物。

本发明的目的二是提供一种采用SCoT分子标记简化箭筈豌豆品种纯度鉴定试剂盒。

本发明的目的三是提供一种采用SCoT分子标记简化箭筈豌豆品种纯度鉴定的方法。

以此对箭筈豌豆种质纯度进行高效准确的鉴定。此分子标记方法科学，高效，便捷，在实验室条件下6h之内即可完成。在本发明中，实验所用的4个箭筈豌豆种质均适用，说明该方法具有很强的实用性和应用价值，适合推广使用，有利于广大种检人员快速准确的鉴定种质纯度。本发明在我国牧草产业发展中，具有广泛的应用前景，为我国的饲草种质安全提供重要保障，保证了培育者的切身利益，为牧草种质资源的发展提供了有力的技术支持。