[发明专利]CAR修饰的NK细胞的制备方法在审
| 申请号： | 201710025330.X | 申请日： | 2017-01-13 |
| 公开（公告）号： | CN106701685A | 公开（公告）日： | 2017-05-24 |
| 发明（设计）人： | 毛海燕 | 申请（专利权）人： | 广东康普泰生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10 |
| 代理公司： | 广州嘉权专利商标事务所有限公司44205 | 代理人： | 王国标 |
| 地址： | 528000 广东省佛山市南海区桂城街*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | car 修饰 nk 细胞 制备 方法 | ||
【权利要求书】：
1.CAR修饰的NK细胞的制备方法，其特征在于，构建成含特异结合信号淋巴细胞激活分子家族成员的嵌合抗原受体基因重组到病毒载体上并转染NK细胞；
所述CAR基因的cDNA构建在病毒载体中，并转染NK细胞，再将NK细胞培养到第21天，获得CAR-NK细胞；通过荧光定量PCR技术检测，转染了CAR病毒载体的NK细胞其表达CAR基因高于未转染的NK细胞为50倍以上；
所获得的CAR-NK细胞能高表达CAR基因，可特异结合表达信号淋巴细胞激活分子家族成员的肿瘤细胞，并抑制NK细胞抑制性受体表达，阻止了肿瘤细胞免疫逃避，同时激活第一信号和共刺激信号；其高表达其特异标志物CD16，阳性率高于80％以上，激活性受体阳性率超过80％以上，而抑制性受体阳性率低于10％以下。
2.根据权利要求1所述的CAR修饰的NK细胞的制备方法，其特征在于，所述的含特异结合信号淋巴细胞激活分子家族成员的特异嵌合抗原受体基因，包括特异结合信号淋巴细胞激活分子家族成员7的单链抗体并串联了两个共刺激分子胞内域和CD3ζ胞内信号区的基因片段；所述两个共刺激分子为CD28和CD137。
3.根据权利要求1或2所述的CAR修饰的NK细胞的制备方法，其特征在于，所述NK细胞来源于自体静脉血、自体骨髓、脐带血和胎盘血等的单个核细胞。
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