[发明专利]131I标记的抗人神经纤毛蛋白受体‑2单克隆抗体E4及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种单克隆抗体，特别是涉及一种¹³¹I标记的抗人神经纤毛蛋白受体-2单克隆抗体E4及其应用。

背景技术

在人类肿瘤细胞，如：恶性胶质瘤细胞，黑色素瘤，结直肠癌，膀胱肿瘤，胰腺肿瘤，肺癌，乳腺癌等恶性肿瘤中，神经纤毛蛋白受体-2(Neuropilins-2，NRP-2)呈现高表达，而且NRP-2的表达与肿瘤治疗的抵抗性和患者预后密切相关。因此，NRP-2有可能成为肿瘤显像与治疗研究的新靶点，但是，目前缺少相应研究及应用。

发明内容

本发明目的在于为了克服现有技术的上述缺陷，提供一种¹³¹I标记的抗人神经纤毛蛋白受体-2单克隆抗体E4，本发明目的还在于提供其应用。

为实现上述目的，本发明¹³¹I标记的抗人神经纤毛蛋白受体-2单克隆抗体E4是采用氯胺T标法对E4抗体进行¹³¹I标记：取E4抗体，Na¹³¹I和pH值7.4-7.6的PBS加入EP管，加入新配置的氯胺T，迅速振荡混匀，室温下反应后，再加入新配置的还原剂偏重亚硫酸钠终止碘化反应；取出反应液，以生理盐水为展开剂，用TLC测定标记产物的标记率；将上述反应液，通过SephadexG25柱，以pH值7.4左右的PBS为淋洗液进行纯化，得到¹³¹I-E4。即是以人源性E4抗体、Na¹³¹I、氯氨T为原料，采用氯胺T标法对E4抗体进行¹³¹I标记，经纯化，得到¹³¹I-E4。人源化E4抗体是利用RT-PCR技术获得NRP-2蛋白b1b2结构域(NRP-2/b1b1)的基因并克隆到原核表达载体pET-22b(+)中，将重组质粒转化到E.coli Rosetta中，诱导表达得到NRP-2/b1b2融合蛋白作为免疫原，建立了能稳定分泌抗NRP-2/b1b2单克隆抗体的杂交瘤细胞株。采用腹水法制备抗人NRP-2单克隆抗体并用rProtein A亲和柱纯化抗体，得到¹³¹I-E4或抗人NRP-2单克隆抗体E4。本发明应用了放射免疫显像技术，将放射性核素的优点和抗肿瘤细胞人源化单克隆抗体集于一体，提高了药物对肿瘤细胞的靶向性和分子显像效能，提高NRP-2表达阳性肿瘤早期诊断率和监测疗效，适用范围更加广泛，适用于各期NRP-2表达阳性肿瘤显像。

作为优化，E4抗体为100μg；Na¹³¹I为55.5MBq，25μl；PBS为100μl；新配置的氯胺T为50μl，1mg/ml的氯胺T；pH值7.4左右的PBS淋洗液为pH值7.4的2ml PBS淋洗液。E4抗体来自厦门大学医学院抗癌中心，氯胺T购自中国百灵威科技有限公司上海分公司，规格：100mg，型号：CAS 7080-50-4。

作为优化，室温下反应是室温下反应1-5min。

作为优化，经纯化得到的¹³¹I-E4用TLC测定标记产物的标记率为94.69±3.63％，放化纯为98.56±0.48％。

作为优化，得到的¹³¹I-E4加入PBS稀释配制成肿瘤显像注射剂。

作为优化，得到的¹³¹I-E4配制成用于肿瘤治疗的抗人NRP-2单克隆抗体E4注射剂。

作为优化，所述配制是得到的¹³¹I-E4加入PBS稀释制成肿瘤显像注射剂或用于肿瘤治疗的抗人NRP-2单克隆抗体E4注射剂。所述肿瘤显像是各期NRP-2表达阳性肿瘤显像。

本发明所述¹³¹I标记的抗人神经纤毛蛋白受体-2单克隆抗体E4的应用是用于制备肿瘤显像与治疗的注射剂。

作为优化，所述制备是加入PBS稀释配制成用于肿瘤显像的注射剂。所述肿瘤显像是各期NRP-2表达阳性肿瘤显像。

作为优化，所述制备是加入PBS稀释配制成用于肿瘤治疗的抗人NRP-2单克隆抗体E4注射剂。

本发明是将放射性核素的优点和抗肿瘤细胞人源化单克隆抗体集于一体，提高了药物对肿瘤细胞的靶向性和分子显像效能，提高NRP-2表达阳性肿瘤早期诊断率和监测疗效，适用范围更加广泛，适用于各期NRP-2表达阳性肿瘤显像。