[发明专利]一种用于L-苹果酸的分离方法

权利要求书

1.一种用于L-苹果酸的分离方法，所述分离方法包括如下步骤：

步骤1）制备米曲霉种子液：将米曲霉菌液按照8％的接种量接入米曲霉种子罐中进行培养，在温度为33℃，摇床转速为200r/min，培养16小时得到米曲霉种子液；

步骤2）制备寄生曲霉种子液：将寄生曲霉菌液按照6％的接种量接入寄生曲霉种子罐中进行培养，在温度为32℃，摇床转速为200r/min，培养24小时得到寄生曲霉种子液；

步骤3）发酵：将米曲霉种子液和寄生曲霉种子液按照3:2的体积比混匀得到混合种子液，然后按照混合种子液∶发酵罐培养基为1∶8的体积比例转入发酵罐中培养，温度33℃，培养3d，然后添加碳酸钙，维持碳酸钙的浓度在80g/L，继续发酵3d，停止发酵，得到L-苹果酸发酵液；

步骤4）离心、过滤以及离子交换：将L-苹果酸发酵液2000rpm离心10min，去除沉淀，收集上清液，微滤膜过滤，截留分子量为10000Da，微滤温度为30℃；滤过液再进行超滤，截留分子量为1000Da，超滤温度为30℃，收集透过液，将透过液通过装填有强碱弱酸型两性离子交换树脂的色谱柱，然后洗脱吸附于树脂上的苹果酸，将得到的洗脱液减压蒸馏，真空干燥，得到L-苹果酸;

所述米曲霉为米曲霉(Aspergillus oryzae) ACCC30584，所述寄生曲霉为寄生曲霉(Aspergillus parasiticus)CICC40365。

2.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于，所述米曲霉种子罐的培养基组分为：蔗糖3g，硝酸钠0.2g，硫酸铵0.5g，磷酸二氢钾0.1g，磷酸氢二钾0.1g，一水硫酸锰0.1g，七水硫酸亚铁0.01g，硫酸镁0.01g，氯化钠0.01g，pH值6.0。

3.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于，所述寄生曲霉种子罐的培养基组分为：木糖10g，硫酸铵0.5g，磷酸二氢钾0.2g，磷酸氢二钾0.1g，一水硫酸锰0.1g，七水硫酸亚铁0.01g，硫酸镁0.01g，pH值6.5。

4.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于，所述发酵罐培养基组分为：碳酸钙80g/L，葡萄糖60g/L，木糖50 g/L，玉米浆12g/L，硫酸铵2g/L，硫酸镁0.5 g/L，磷酸二氢钾0.2g/L，磷酸氢二钾0.1g/L，七水硫酸亚铁0.01g/L，pH值6.2。