[发明专利]猪瘟-猪圆环二联亚单位的疫苗及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种猪瘟‑猪圆环二联亚单位的疫苗及其制备方法和应用，属于动物疫苗与兽用生物制品技术领域。所述疫苗包含猪瘟病毒E2蛋白和猪圆环病毒2型Cap蛋白以及药学上可以接受的佐剂。制备该疫苗的方法包括以下步骤：1)制备猪瘟病毒E2蛋白和猪圆环病毒2型Cap蛋白；2)将1)中制备的猪瘟病毒E2蛋白和猪圆环病毒2型Cap蛋白制备成抗原液；3)将抗原液与Montanide GEL 01PR佐剂按照质量比10:1混合搅拌。本发明的疫苗具有免疫原性强、安全性好、不存在免疫干扰、不会导致病毒变易的生物安全隐患、能够从根本上净化猪瘟病毒和猪圆环病毒2型等优点；且通过该疫苗进行免疫接种，能够达到“一针两防”的效果，省时、省力、节约成本。

技术领域

本发明涉及一种猪瘟-猪圆环二联亚单位疫苗及其制备方法和应用，属于动物疫苗与兽用生物制品技术领域。

背景技术

猪瘟是由猪瘟病毒(Classical Swine Fever Virus,CSFV)引起的一种急性、热性、致死性疾病。猪瘟具有高度接触传染性、发病急、高热稽留和小血管壁变性引起广泛出血、梗塞和坏死等病变特征。家养猪和野生猪是其唯一的天然宿主。世界动物卫生组织(OIE)将其定为A类传染病，我国《动物防疫法》将其列为一类传染病。猪瘟是目前危害我国养猪业发展的主要疫病之一。

猪瘟病毒属于黄病毒科、瘟病毒属成员，为单链线状RNA病毒。病毒粒子略呈圆形，具有脂蛋白囊膜，病毒粒子表面有脆弱的纤突结构。CSFV基因组全长约12.5kb，仅含有1个大的开放性阅读框(ORF)，此ORF编码约3898个氨基酸残基、分子量约438kDa的多聚蛋白。此多聚蛋白在翻译的同时和在翻译后经病毒与宿主细胞蛋白酶加工成12种成熟蛋白，依次为Npro,C,Erns,E1,E2,p7,NS2,NS3,NS4A,NS4B,NS5A,NS5B，其中C,Erns,E1和E2为结构蛋白,其余为非结构蛋白。E2是CSFV最主要的免疫原性蛋白，能够诱导机体产生中和抗体并且能够保护猪抵抗CSFV强毒株的攻击，也是研究猪瘟基因工程疫苗的重要靶蛋白。

猪圆环病毒2型(Porcine circovirus,PCV-2)被认为是仔猪断奶后多系统衰竭综合征(PMWS)、猪增生性坏死性肺炎(PNP)、猪皮肤与肾病综合征(PDNS)、猪呼吸系统疾病综合征(PRDC)、猪繁殖障碍、猪先天性震颤及肠炎等疾病的主要病原，统称为猪圆环病毒2型相关疾病，而且PCV-2感染还会引起免疫抑制，极易导致其它病原混合感染或继发感染，是目前严重危害我国养猪业的病原之一。在我国，目前几乎100％的猪场为猪圆环病毒2型阳性。

PCV2是目前已知的最小的病毒之一，其基因组是一条共价闭合单链DNA，约1.76kb～1.77kb。一般认为，PCV2仅有3个开放阅读框(open reading frames，ORFs)可以编码蛋白。其中ORF2又称为Cap基因，位于互补链上，呈逆时针方向，负责编码唯一的结构蛋白Cap蛋白，其氨基酸长度为233～234氨基酸残基。Cap蛋白也是PCV2的主要抗原，能诱导中和抗体的产生并且能够保护猪抵抗PCV2强毒株的攻击，也是研究猪圆环病毒2型基因工程疫苗的重要靶蛋白。

在我们规模化养殖的发展中，由于频繁引种、生物安全防范意识较差、管理不到位、人员专业素质较低等原因导致目前规模化猪场疾病多且杂，疫苗免疫仍是防治这些疾病爆发的首要选择。因此，目前猪用疫苗很多，一头商品猪在整个生长周期中，要进行多次免疫接种。在实际操作中，多针次、多剂量、多种疾病免疫程序难以合理安排，这样既繁琐、费时、费力、增加成本，而且容易造成遗漏，直接影响免疫效果和猪群的健康。因此，研究能同时预防2种或2种以上疾病的猪用疫苗是猪用兽用制品的一个发展方向。