[发明专利]CHO细胞表达牛传染性病气管炎病毒gD蛋白及其亚单位疫苗的制备和应用在审
| 申请号： | 201710023620.0 | 申请日： | 2017-01-13 |
| 公开（公告）号： | CN107973840A | 公开（公告）日： | 2018-05-01 |
| 发明（设计）人： | 钱泓;吴有强;卞广林;张强;吴素芳;车影;宋月鸿;吕洋萍;陈滨;查银河 | 申请（专利权）人： | 浙江海隆生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/06 | 分类号： | C07K14/06;C12N15/85;C12N5/10;A61K39/265;A61P31/22;G01N33/569 |
| 代理公司： | 北京乾诚五洲知识产权代理有限责任公司11042 | 代理人： | 付晓青,李广文 |
| 地址： | 312000 浙江省绍兴市*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | cho 细胞 表达 传染 性病 气管炎 病毒 gd 蛋白 及其 单位 疫苗 制备 应用 | ||
1.一种重组牛传染性鼻气管炎病毒gD蛋白的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：
1)将牛传染性鼻气管炎病毒gD蛋白基因克隆到真核表达载体中得到含有牛传染性鼻气管炎病毒gD蛋白编码基因的重组质粒；
2)再将含有牛传染性鼻气管炎病毒gD蛋白编码基因的重组质粒转染至CHO细胞中；
3)通过培养、筛选、驯化2)中所述CHO细胞株得到高度表达的细胞株；
4)发酵培养3)中所述细胞株，纯化后得到重组牛传染性鼻气管炎病毒gD蛋白。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述含有牛传染性鼻气管炎病毒gD蛋白编码基因的重组质粒是先将牛传染性鼻气管炎病毒gD蛋白编码基因进行密码子优化，然后克隆到真核表达载体中，得到重组质粒。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述牛传染性鼻气管炎病毒gD蛋白编码基因如SEQ ID NO.1所示。
4.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述真核表达载体为pEE12.4。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述CHO细胞为CHO-K1细胞。
6.一种含有重组牛传染性鼻气管炎病毒gD蛋白亚单位疫苗的制备方法，其特征在于，将根据权利要求1所述的制备方法得到的重组牛传染性鼻气管炎病毒gD蛋白与药学上可接受的佐剂充分混匀，得到牛传染性鼻气管炎病毒gD重组亚单位疫苗。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，重组亚单位疫苗所用佐剂为ISA 201VG。
8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述重组牛传染性鼻气管炎病毒gD蛋白与佐剂ISA 201VG按体积比46:54混合乳化。
9.一种根据权利要求1～8任一所述的重组牛传染性鼻气管炎病毒gD蛋白和牛传染性鼻气管炎病毒重组亚单位疫苗在制备及相关诊断试剂中的应用。
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