[发明专利]牛病毒性腹泻‑牛传染性鼻气管炎二联亚单位疫苗及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种牛病毒性腹泻-牛传染性鼻气管炎二联亚单位疫苗的制备方法和应用，属于动物疫苗与兽用生物制品技术领域。

背景技术

牛病毒性腹泻(Bovine viral diarrhea,BVD)又称牛黏膜病(Mucosal diaease,MD)是由病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)引起的，临床表现为腹泻、高热、繁殖障碍、免疫抑制、持续性感染和严重的黏膜发炎，糜烂、坏死为特征的疾病。BVDV属于黄病毒科瘟病毒属。该病最早于1946年发现于美国，后呈爆发式全球流行。在美国、英国、德国、瑞士、澳大利亚、印度、日本等多个养牛大国广泛流行传播。1983年我国首次有报道该病发生，目前在全国已有20多个省、市、自治区存在BVD。2008年，中华人民共和国农业部发布第96号公告，将牛病毒性腹泻定义为三类疫病；世界动物卫生组织也将该病列为法定报告的动物疫病及动物胚胎交流病原名录三类疫病。该病流行范围很广，除牛外，还能感染羊、骆驼、鹿和袋鼠，甚至还有感染人的报道。BVDV主要通过消化道和呼吸道感染动物，既能水平传播也能垂直传播，大多数呈持续性感染(PI)，且免疫抑制容易继发感染黏膜病，死亡率高达100％。这给全世界的养牛业造成了严重的经济损失。

BVDV基因组为单股正链RNA，全长约12.5Kb，仅含有一个能编码约4,000个氨基酸多聚蛋白的ORF，多聚蛋白经翻译和加工后，可形成11种成熟的蛋白，其中C、Erns、E1、E2是病毒的结构蛋白。E2是BVDV的囊膜蛋白，免疫原性最强，能同时诱导机体产生体液免疫和细胞免疫，并产生中和抗体，因此是制备检测抗原和疫苗的首选基因。

牛传染性鼻气管炎(Infectious Bovine Rhinotracheitis，IBR)是由牛传染性鼻气管炎病毒(Infectious Bovine Rhinotracheitis virus，IBRV)引起的一种急性、热性、接触性传染病，它以高热、呼吸困难、鼻炎、窦炎和上呼吸道炎症为特征。该病毒还可引起母牛生殖系统损害，出现流产、死胎和发生肠炎和小牛脑炎，有时还发生眼结膜炎和角膜炎。该病对奶牛的产奶量、公牛的繁殖力及使役牛的使役力均有较大的影响，并且急性的IBR呼吸道感染可继发牛致命性细菌性肺炎。该病于20世纪50年代初最早报道于美国，但目前世界范围内流行。我国1980年首次从新西兰进口种牛中发现此病，目前在大部分省份的奶牛、黄牛和水牛均有IBRV感染。流行病学调查显示，我国14个养牛主要省份IBRV平均感染率为33.3％，造成较大的经济损失，是目前造成养牛业经济损失的主要原因之一。

IBRV基因组由一个长独特区(UL,106kb)和一个短独特区(Us,l0kb)及Us区两侧的重复序列IRs和TRs组成，IBRV基因组为双股线性DNA分子，约138kb。整个基因组编码33个结构蛋白和15个非结构蛋白，其中四个糖蛋白gB、gC、gD和gE是IBRV的主要抗原，而gD蛋白是病毒粒子表面和病毒感染细胞的主要分子，是IBRV的主要结构蛋白，同时也是IBRV复制的必需基因，是刺激机体产生中和抗体的主要糖蛋白，它不但能诱导体液免疫，也能诱导细胞免疫，因此gD是制备IBRV检测抗原和疫苗的首选基因。

目前，两种疾病的商品化疫苗主要是弱毒活疫苗和灭活疫苗，二者各有优缺点。弱毒活疫苗能快速诱导免疫反应、免疫持续期长且可诱导局部粘膜免疫，但是免疫活疫苗后整个牛群始终带毒，且有可能造成毒力返强；灭活疫苗的优势在于其安全，不存在排毒、无流产及持续性感染的风险，但是，灭活疫苗诱导产生的免疫反应持续时间较短，需要多次接种，且不能诱导细胞毒T淋巴细胞反应。目前我国商品化的疫苗很少，养牛业面临着巨大的威胁，而进口苗价格昂贵，发生疫情时无计可施。在临床病例研究中发现，BVDV和IBRV往往混合感染。因此急需研制一种新型的疫苗，该疫苗的免疫原性强、安全性好、成本低，且该疫苗能够同时预防上述两种疫病。