[发明专利]生长激素定量检测试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种生长激素定量检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

生长激素（Growth Hormone，GH）是腺垂体细胞分泌的蛋白质，为一种肽类激素，血清生长激素测定有助于巨人症、肢端肥大症、生长激素缺乏症的诊断。目前，生长激素浓度检测试剂盒90%以上采用化学发光法，且均以血清样品作为检测对象。对于以血清样品作为对象进行检测，具有以下缺点：成本偏高，血标本不易保存、不便远距离递送、运送过程中存在潜在生物安全隐患，给检测者就诊带来不便；采血前，需给检测者服用药物进行生长激素激发试验，并于不同时间段多次采血，通常需要三次（含）以上采血，多次采血不仅造成身体不适，还会对心理造成影响；由于需服用药物进行激发试验，且采血量大，使得检测不适用于新生儿和低龄儿童。

时间分辨免疫荧光测定（Time Resolved Immunofluorometric assay，TRIFMA）是八十年代初问世的一项新型超微量免疫分析技术，其具体原理为：荧光的时间分辨技术是利用荧光发射体的荧光寿命差别，进行分辨的荧光光谱技术，以镧系元素为示踪剂代替放射性同位素，用具有双功能基团的镧系元素标记抗原或抗体，当解离出来的镧系元素与特制的扩增液形成新的螯合物时，其荧光明显增强且持久，在检测时，用延迟测量的方法可大大提高检测灵敏度。

对于生长激素检测，如何制备一种利用时间分辨免疫荧光测定技术、且克服上述缺点的试剂盒，是目前生长激素检测亟待解决的问题之一。

发明内容

本发明主要解决的技术问题是提供一种生长激素定量检测试剂盒及其制备方法，可利用时间分辨免疫荧光测定技术进行生长激素定量检测，且检测时，以滤纸干血片为检测样本，可避免血清样品不易保存、不便运输、需进行生长激素激发试验、采血量大的缺点，同时可确保检测结果与血清样品的检测结果高度一致。

为解决上述技术问题，本发明提供一种生长激素定量检测试剂盒，包括实验缓冲液、浓缩洗液、增强液、包被板、标准品和质控品及标记物；实验缓冲液包括1.0-20.0g/L牛血清白蛋白和第一缓冲液；浓缩洗液包括1.0-10.0ml/L Tween-20和第二缓冲液；增强液包括1-5mg/Lβ-萘甲酰三氟丙酮、15-30mg/L三正辛基氧化磷和第三缓冲液；包被板为采用包被液、封闭液、反应板制成的包被板，包被液包括：1-10ppm Proclin300、第四缓冲液、1-10μg/ml生长激素单克隆抗体，封闭液包括：1.0-10.0g/L海藻糖、质量体积比0.4-0.6%的牛血清白蛋白、第四缓冲液，包被液的包被量为100-200μl/孔，封闭液的封闭量为250-280μl/孔；标准品和质控品为滤纸干血片，滤纸干血片包括8个浓度的混合物，混合物包括血红细胞、去激素阴性血清混合基质和生长激素；标记物由生长激素单克隆抗体与镧系元素离子螯合物按1:1-1:6m/m制得。

其中，第一缓冲液各组分及浓度为：0.009-0.011g/L乙二胺四乙酸二钠，49-51mmol/L、pH7.7-7.9Tris-HCl；第二缓冲液各组分及浓度为：0.384-0.386mol/L NaCl，0.123-0.125mol/L、pH7.7-7.9Tris-HCl；第三缓冲液各组分及浓度为：0.9-1.1ml/L TritonX-100，0.09-0.11mol/L邻苯二甲酸氢钾-冰醋酸；第四缓冲液为0.04-0.06mol/L、pH9.5-9.7碳酸钠-碳酸氢钠。

其中，实验缓冲液的牛血清白蛋白的浓度为10.0g/L，Tween-20的浓度为4.0ml/L，β-萘甲酰三氟丙酮的浓度为4mg/L，三正辛基氧化磷的浓度为20mg/L，Proclin300的浓度为5 ppm，生长激素单克隆抗体的浓度为10μg/ml，海藻糖的浓度为5.0g/L，牛血清白蛋白的浓度为0.5%，生长激素单克隆抗体与镧系元素离子螯合物的比例为1:1m/m。

其中，第一缓冲液各组分及浓度为：0.01g/L乙二胺四乙酸二钠，50mmol/L、pH7.8Tris-HCl；第二缓冲液各组分及浓度为：0.385mol/L NaCl，0.124mol/L、pH7.8Tris-HCl；第三缓冲液各组分及浓度为：1.0ml/L TritonX-100，0.10mol/L邻苯二甲酸氢钾-冰醋酸；第四缓冲液为0.05mol/L、pH9.6碳酸钠-碳酸氢钠。

其中，反应板为96孔反应板。