[发明专利]用于快速鉴定油茶良种岑软2号的特异性标记引物对及鉴定方法

说明书

技术领域

本发明属于油茶鉴定技术领域，尤其涉及用于快速鉴定油茶良种岑软2号的特异性标记引物对及鉴定方法。

背景技术

油茶(Camellia oleifera)是我国南方重要的木本油料树种，与油棕、油橄榄和椰子并称为世界四大木本食用油料植物。油茶籽油中富含油酸、亚油酸等不饱和脂肪酸，含量一般在90％以上，其营养价值和保健价值可与橄榄油相媲美，是名副其实的优质食用植物油。岑溪软枝油茶是我国第一个油茶良种，属普通油茶的一个农家品种，以枝条韧软、挂果下垂而得名，在此基础上先后育成并通过国家或省级良种审、认定的岑软系列高产优良无性系9个，如岑软2号、岑软3号等，这些无性系兼备早实、高产、稳产、优质等优良特性，适宜我国南方及东南亚地区推广应用。

传统的油茶品种鉴别多以形态特征、生物学特征、经济性状为主要依据，但这些指标的评价有时很细微，部分差异仅体现在特定发育阶段(如花期、果期)、特定经济性状(如出籽率、出油率、油品质)等，易受到生态环境、气候变化等因素的影响，且外观表现的数量有限，特别在苗期不具备多数识别特征，单纯依靠经验区分难度极大，导致目前市场上油茶岑软系列油茶优良无性系品种混乱，以劣充优、以实生苗充当无性系的现象常有发生，严重制约了油茶良种化的进程。究其原因，关键问题是缺乏一种快捷、准确适合于油茶品种早期鉴别的技术方法。

自本世纪以来，一些基于PCR的分子标记技术如RAPD(Random Amplified Polymorphic DNA，随机扩增多态性DNA)、ISSR(Inter-Simple Sequence Repeat，简单序列重复区间扩增多态性)和SRAP(sequence-related amplified polymorphism，相关序列扩增多态性)相继用于了油茶的种质资源遗传多样性、遗传距离研究，但对于分子标记与油茶性状的连锁、油茶品种间的分子鉴别研究很少。况且，这些分子标记技术所采用的均为通用引物，其PCR扩增图谱不仅复杂、重复性差，而且特异性不高，因此并不适合用于品种鉴别，只有开发出某个品种稳定、特异的DNA指纹标记才能真正用于该品种的准确快速鉴定。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供特异性高的用于快速鉴定油茶良种岑软2号的特异性标记引物对及鉴定方法，以实现对油茶良种岑软2号进行早期、快速鉴定。

为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：

用于快速鉴定油茶良种岑软2号的特异性标记引物对，包括具有以下碱基序列的上下游引物：

上游引物：5’-ATCATGACTAGTCGTTCTT-3’(SEQ.ID.No.1)，

下游引物：5’-TAGCTACCAGTGTCTTGA-3’(SEQ.ID.No.2)。

油茶良种岑软2号的快速鉴定方法，使用具有以下碱基序列的特异性标记引物对进行PCR扩增：

上游引物：5’-ATCATGACTAGTCGTTCTT-3’，

下游引物：5’-TAGCTACCAGTGTCTTGA-3’。

上述油茶良种岑软2号的快速鉴定方法，提取油茶良种岑软系列品种叶片的基因组DNA作为模板，以特异性标记引物对作为扩增引物进行PCR扩增，再对扩增产物进行电泳检测。

PCR扩增的反应体系和反应程序分别为：

反应体系：2×Power Taq PCR Master Mix 10μL，10μM上下游引物各1μL，DNA模板2.0μL，加ddH₂O至20μL；

反应程序：94℃预变性3min；94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸1min，35个循环；72℃延伸6min；4℃终止反应。