[发明专利]一种精浆超氧化物歧化酶检测试剂盒及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及第二类体外诊断试剂，具体涉及一种精浆超氧化物歧化酶检测试剂盒及其应用。

背景技术

精液中氧自由基和抗氧化剂的平衡是保持正常生育能力的基础，这种平衡的打破可能是造成男性不育和精子质量下降的重要原因。精浆中抗氧化酶主要包括超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)、过氧化氢酶(catalase，CAT)、谷胱甘肽过氧化酶(glutathione peroxidase，GPX)等。抗氧化酶的主要生理功能是防止氧自由基(reactive oxygen species，ROS)对细胞的损害，在正常情况下对细胞的生存也是必不可少的。ROS包括超氧化物阴离子(O₂^-)、过氧化氢(H₂O₂)和羟基(OH^-)，O₂^-是需氧代谢的副产物，它可以自动歧化或被SOD转化为H₂O₂，CAT或GPX则将H₂O₂转为H₂O和O₂，从而清除ROS。在这三种主要的抗氧化酶中，SOD不仅自身能将O₂^-转化为H₂O₂，而且对CAT或GPX将H₂O₂转化为H₂O和O₂的反应具有催化作用，因而在清除ROS的过程中具有关键的作用。当精浆中SOD活性降低时，过多的氧自由基可使精子线粒体膜、精子质膜发生脂质过氧化，从而影响精子活动力，同时，脂质过氧化产生的降解产物如丙二醛等，可抑制精子线粒体功能和包括腺苷酸环化酶在内的多种酶的活性，从而影响精子的运动功能，导致男性不育。

目前临床上尚缺乏精浆中超氧化物歧化酶的检测方法，仅在一些科研文献中报道过邻苯三酚法、黄嘌呤氧化酶法、放射免疫分析法(RIA)和四唑盐法(WST-1法)等检测方法，且均为手工法，加样程序多，操作步骤复杂，不但耗时耗力，而且人为误差也比较大，因此大大限制了其在临床上的广泛应用。在血清超氧化物歧化酶的检测中有应用到全自动生化分析仪，但是由于血清和精浆的组成和超氧化物歧化酶活性的差异，目前没有文献证明运用全自动生化分析仪检测血清中超氧化物歧化酶的试剂盒适用于检测精浆中超氧化物歧化酶。

发明内容

发明目的：针对现有技术存在的问题，本发明提供一种精浆超氧化物歧化酶检测试剂盒，该试剂盒在检测精浆超氧化物歧化酶时，基质效应小、需要试剂量和样本量少、结果的准确度和精密度高，同时可与精浆生化的其他项目联检。

本发明还提供了一种精浆超氧化物歧化酶检测试剂盒的应用，该试剂盒可以在全自动生化分析仪上应用。

技术方案：为了实现上述目的，如本发明所述的一种精浆超氧化物歧化酶，包括R1试剂、R2试剂、校准品和冻干精浆质控品；所述R1试剂为包含EDTA·2Na的Tris-HCl缓冲液；所述的R2试剂为包含邻苯三酚的盐酸溶液；所述校准品为超氧化物歧化酶溶液；所述冻干精浆质控品为定值的含超氧化物歧化酶的精浆冻干粉。

其中，所述R1试剂中EDTA·2Na的浓度为0.5～5.0mmol/L，Tris的浓度0.01～0.06mol/L，pH为8.0～8.5。

所述R2试剂中邻苯三酚的浓度为0.5～2.5mmol/L，盐酸的浓度为0.005～0.015mol/L。

所述校准品活性为30U/mL和90U/mL。

所述超氧化物歧化酶溶液的溶剂为包含酶保护剂的磷酸盐缓冲液，pH＝7.5～8.0，其中酶保护剂为D-海藻糖，浓度为0.15～0.5mol/L。选用pH＝7.5～8.0的磷酸盐缓冲液时超氧化物歧化酶的活性最好；磷酸盐缓冲液优选由磷酸二氢钠和磷酸氢二钠配制，其中缓冲液中磷酸根浓度为0.01～0.1mol/L。

所述冻干精浆质控品在冻干前加入保护剂蔗糖、甘氨酸和NaCl，以及防腐剂山梨酸钾，使蔗糖、甘氨酸、NaCl和山梨酸钾的浓度分别为0.01～0.02mol/L、0.05～0.1mol/L、0.01～0.03mol/L和0.01～0.03g/dl，精浆已被检定HBsAg、HCV抗体、HIV1+2抗体和梅毒均为阴性。

所述冻干精浆质控品的定值范围通过以下步骤获得：