[发明专利]UBC9的反义核苷酸序列在制备抑制癌细胞生长药物中的应用

说明书

本发明公开了UBC9的反义核苷酸序列在制备抑制癌细胞生长药物中的应用。在本发明中，设计合成了一条UBC9特异性的反义核苷酸序列，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明利用UBC9特异性的反义核苷酸序列，通过RNAi干扰的方法降低含双微体的恶性肿瘤细胞中的UBC9表达水平，减少双微体数目，从而达到降低肿瘤细胞的恶性程度，有效抑制恶性肿瘤细胞生长的目的。本发明的提出为针对含双微体的恶性肿瘤细胞的生物治疗提供了新的靶向性治疗方案。

技术领域

本发明涉及UBC9的反义核苷酸序列的新用途，具体的，本发明涉及NSMCE2的反义核苷酸序列在制备抑制癌细胞生长药物中的应用，属于肿瘤生物治疗技术领域。

背景技术

人类的UBC9基因(Ubiquitin-conjugating enzyme)又名UBE2I。UBC9基因在人类组织和器官中普遍高表达，其在生物体的不同组织和不同发育阶段所发挥的生物学功能不同，该基因的缺失对于生物体来说是致命的。UBC9基因的缺失会导致肿瘤细胞的生长能力和侵袭能力下降，细胞整体的SUMO化水平降低，凋亡细胞的比例增加，细胞出现核内复制和衰老。UBC9基因在恶性肿瘤中的研究已取得了明显的进展，部分的阐明了UBC9基因在肿瘤的发生、发展和预后中的重要作用。

UBC9蛋白参与细胞周期、DNA损伤修复等重要通路的调节，在细胞的生长、分化和凋亡调控等方面起到重要的作用。近年来的研究证明了UBC9蛋白在结肠癌、卵巢癌、乳腺癌和肺癌等癌症中普遍高表达。UBC9蛋白的这种高表达会通过SUMO化途径和它自身所介导的途径在肿瘤的发生和发展中起到重要的作用，其作为SUMO化途径中的关键酶也越来越受到关注。

双微体做为肿瘤恶性程度的标志物，在肿瘤细胞的增殖和凋亡等方面发挥着重要的作用，并且双微体上往往携带着大量的MYC基因。

双微体是染色体外癌基因扩增的主要标志物，其为肿瘤恶性程度的标志物，在肿瘤细胞的增殖和凋亡等方面发挥着重要的作用，并且其上通常携带有癌基因和耐药基因，这些基因的异常扩增，往往会导致肿瘤耐药和生长能力增强，与肿瘤细胞的基因组不稳定、恶性程度增加和耐药性密切相关。双微体经常伴随着恶性疾病而产生，并且在实体瘤中的发生率很高。在血液系统瘤和实体瘤中常常伴随着癌基因MYC的异常表达，针对UBC9基因的沉默会抑制MYC基因的表达，进而影响肿瘤细胞的产生。这些提示我们，双微体可能在肿瘤的进化和恶化程度等方面发挥着一定的作用。

针对肿瘤细胞的特点进行特异性治疗可以提高肿瘤治疗的敏感性和特异性，有的放矢，本发明针对与卵巢癌细胞和结直肠腺癌细胞发生发展密切相关的UBC9，用其反义核苷酸序列进行干扰，通过抑制UBC9的表达从而抑制恶性肿瘤细胞生长，针对这一与肿瘤细胞中双微体形成密切相关的重要靶点进行干预，通过减少肿瘤细胞中双微体数目，从而抑制恶性肿瘤细胞的生长。

发明内容

本发明针对目前肿瘤治疗效果欠佳的情况，提供一种通过UBC9的反义核苷酸序列干扰UBC9表达，从而抑制含双微体细胞的恶性表型，起到抑制恶性肿瘤细胞的生长的作用。

本发明的技术方案是特异性的针UBC9扩增以其反义核苷酸序列进行RNA干扰，从而抑制含双微体细胞的恶性表型，起到抑制恶性肿瘤细胞的生长的作用。

具体的，本发明采用了以下技术方案：

1、建立稳定转染细胞系

选择含双微体的人卵巢癌细胞UACC-1598-4和人结直肠腺癌细胞COLO320DM细胞为研究对象。

(1)应用Real-time PCR对SUMO化途径中的基因进行筛选；

(2)然后利用Western blot在几种肿瘤细胞模型中检测所选基因的蛋白表达水平；

(3)选择含有双微体的恶性肿瘤细胞系UACC-1598-4和COLO320DM为本实验所用细胞系；