[发明专利]安卡拉病毒毒株FAdV‑HB及其灭活疫苗的制备和应用

说明书

技术领域

本发明涉及动物疫苗制备技术领域，具体地指一种安卡拉病毒毒株FAdV-HB及其灭活疫苗的制备和应用。

背景技术

禽腺病毒(Fowl adenovirus)根据不同的群特异性抗原分为三个群:I群，II群和III群。I群禽腺病毒包括传统的禽腺病毒(Fowl adenovirus，FAV)及其它禽类分离物，共12个血清型，代表株为鸡胚致死孤儿病毒(chicken embryo lethal orphan,CELO)。Ⅱ群禽腺病毒包括火鸡出血性肠炎病毒(HEV)、雉鸡大理石脾病毒和鸡大脾病毒，它们与I群禽腺病毒无抗原相关性(Domermuth et al.,1980)。Ⅲ群禽腺病毒是与减蛋综合征(egg drop syndrome,EDS)有关的一类病毒，可从鸡、鸡、鹅体内分离得到，致病性差异很大(Russell W C.,1995)，它们只是部分含有I群禽腺病毒的共同抗原(McFerran et al.,1978)。

I群禽腺病毒呈现世界性分布，可感染多种禽类，在鸭鹅体内多呈隐性感染，但是对鸡的致病力较强。其所有12个血清型均能引起包涵体肝炎(IBH),只有血清4型禽腺病毒是心包积水肝炎综合征(HHS)的主要病原。很多研究表明，腺病毒相关病毒(adeno-associated viruses,AAV)传染性法氏囊病毒和鸡传染性贫血病毒可有效增强I群禽腺病毒的致病性(Fadly et al.,1976)。

心包积水-肝炎综合征是由血清4型禽腺病毒(FAdV-4)引起的一种新型家禽疾病，其典型症状是导致3～5周龄肉鸡突然死亡，并伴有严重的心包积水和肝炎，因此而得名。又因本病1987年首次于报道于巴基斯坦安卡拉地区，故该病又被称为安卡拉病。随后本病逐渐蔓延至世界各地，给养禽业造成巨大的经济损失。FAdV-4具有明显的致病年龄段，对3-5周龄的致病力最强，即可通过水平传播也可通过垂直传播。其主要病变为心包腔积有清亮或淡黄色的水样或果冻状液体，肝脏有局灶性坏死出血。病理组织切片观察肝脏，肝细胞出现大量的嗜碱性核内包涵体。

本病主要发生于3～5周龄的肉鸡、817麻鸡，偶见于20周龄肉种鸡和蛋鸡，其中以3～7周龄的鸡易发病。发病鸡群多于感染后3周龄开始死亡，4～5周龄达高峰，高峰持续期4～8d，5～6周龄死亡减少。病程8～15d，死亡率高达80％。发病鸡无明显先兆而突然倒地，沉郁，羽毛成束，出现呼吸道症状，两腿划空。鸡感染后可成为终身带毒者，并可间歇性排毒。

自2014年江苏省第一次报到禽腺病毒的爆发，本病已在全国多地集中爆发，尤其是河南湖北和山东等地，对养禽产业造成巨大损失。通过对我国流行的Ⅰ群禽腺病毒进行血清型和基因型分析，发现我国主要流行A、B、C三种基因型，共6个血清型(火鸡1型、1型、4型、5型、8a/b型)。调查发现近期在豫南、皖北、苏北、鲁西北和胶东地区流行的禽腺病毒主要是血清4型和8a/b型，对鸡群的致死率较高，发病急，蔓延迅速，对我国的养禽业造成了巨大的威胁。因此，研制安全有效的I群禽腺病毒灭活疫苗，为提高国内I群禽腺病毒疫苗的防控能力和防止I群禽腺病毒蔓延具有重要的使用意义。

发明内容

本发明目的是提供一种安卡拉病毒毒株FAdV-HB及其灭活疫苗的制备和应用。该安卡拉病毒毒株FAdV-HB具有免疫原性好、增殖滴度高

该制备方法将FAdV-HB毒株接种在鸡肝癌细胞(LMH)上，使病毒能在鸡肝癌细胞(LMH)上增殖，制备出能产生较高抗体的安卡拉病毒灭活疫苗。疫苗的生产工艺、安全性、保护效果、免疫程序和有效期实验研究表明该疫苗是安全有效的。

为实现上述目的，本发明提供的一株安卡拉病毒毒株FAdV-HB，从湖北应城发病鸡场的肝脏组织样品中分离得到，经PCR扩增，连接T载体进行测序检测鉴定该病毒为安卡拉病毒。该毒株FAdV-HB命名为：I群禽腺病毒株FAdv-HB，该毒株于2017年1月3日送交中国.武汉.武汉大学中国典型培养物保藏中心(CCTCC)保藏，保藏编号为CCTCC NO：V201703。

上述毒株FAdV-HB的形态特征：