[发明专利]百子莲组织蛋白酶B及其编码基因和探针及应用

说明书

本发明公开一种百子莲组织蛋白酶B及其编码基因和探针及应用，所述蛋白质为如下(a)或(b)的蛋白质：(a)由如SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列组成的蛋白质；(b)SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列经过取代、缺失或者添加一个或几个氨基酸且具有百子莲ApCathB蛋白活性的由(a)衍生的蛋白质。本发明还提供了一种编码上述蛋白质的核酸序列，以及检测上述核酸序列的探针；本发明为进一步研究该酶的性质及基因和蛋白在各种生理、病理状态的表达水平奠定基础，进而利用蛋白质工程技术获得组织蛋白酶B蛋白，开发其在诊断和治疗肿瘤、农业病虫害防治、食品肉质的嫩化增香及细胞株的分离等方面潜在的应用前景。

技术领域

本发明涉及百子莲组织蛋白酶B(ApCathB)及其编码基因和探针，具体涉及一种百子莲组织蛋白酶B(ApCathB)及其编码基因和探针及应用。

背景技术

组织蛋白酶B是一类裂解肽键的半胱氨酸蛋白水解酶，其催化作用由Cys和His实现，属于木瓜蛋白酶家族。在pH3.0～7.0都具有活性，碱性条件下会不可逆失活。其水解位点为-Arg-Arg-/-Xaa，且能够在羧基端按顺序水解二肽，因此也叫做羧基二肽酶(carboxy-dipeptidase)。

组织蛋白酶B具有广谱的蛋白水解活性，对多种动物蛋白(血红蛋白、血清蛋白、卵黄磷蛋白、明胶等)和植物蛋白(大豆、玉米、棉籽蛋白等)都有水解活性。组织蛋白酶B在溶酶体降解蛋白质途径中发挥着必不可少的作用，当胞外蛋白质、血浆蛋白、激素和被吞噬的细菌等进入细胞即被溶酶体内蛋白水解酶水解，进行细胞内消化，从而使蛋白质的合成与降解保持精确的平衡。同时，组织蛋白酶B还参与到植物对外源细菌的抵御、植物衰老以及细胞凋亡等途径。其中组织蛋白酶B能直接或间接激活Caspase(天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶)而触发细胞凋亡，从而加速组织自溶。

随着人们对组织蛋白酶B的研究逐步深入，有关该酶的性质及基因和蛋白水平在各种生理、病理状态的研究，使其在诊断和治疗肿瘤、农业病虫害防治、食品肉质的嫩化增香及细胞株的分离等方面均显示了其潜在的应用前景。组织蛋白酶B的编码基因已从多种植物中克隆出来，包括：拟南芥、水稻、玉米、大豆等。但对于观赏植物，尤其是球根花卉中，组织蛋白酶B的克隆、表达模式及蛋白序列尚不清楚。目前，未有任何与百子莲组织蛋白酶B蛋白及其编码基因序列相关的文献报道。

发明内容

针对现有技术中的缺陷，本发明的目的在于填补百子莲组织蛋白酶B(ApCathB)基因的克隆、表达模式分析以及百子莲ApCathB蛋白的空白，提供了一种百子莲ApCathB蛋白，本发明还提供了一种编码上述蛋白质的核酸序列以及检测所述核酸序列的探针；本发明公开了百子莲ApCathB基因转化拟南芥后的生理效应及表达模式，从而为今后利用基因工程技术对ApCathB基因表达的时空特性进行调控提供理论依据，具有很大的应用价值。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

第一方面，本发明提供一种百子莲组织蛋白酶B，包括如下(a)或(b)的蛋白质：

(a)由如SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

(b)SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列经过取代、缺失或者添加一个或几个氨基酸且具有百子莲ApCathB蛋白活性的由(a)衍生的蛋白质。

优选地，所述蛋白质为SEQ ID NO.4所示氨基酸序列经过1～50个氨基酸的缺失、插入和/或取代，或者在C末端和/或N末端添加1～20个以内氨基酸而得到的序列。

优选地，所述蛋白质为SEQ ID NO.4所示氨基酸序列中1～10个氨基酸被性质相似或相近的氨基酸所替换而形成的序列。

第二方面，本发明提供了一种编码百子莲组织蛋白酶B的核酸序列。

优选地，所述核酸序列具体为：