[发明专利]亚甲基二氧吡咯戊酮人工抗原的制备方法以及运用

说明书

本发明提供了一种亚甲基二氧吡咯戊酮人工抗原的制备方法。首先制备半抗原：以溴丁烷和金属镁为原料在无水乙醚中制备出溴丁烷格氏试剂，再以溴丁烷格氏试剂与和3,4‑亚甲二氧苯甲腈为原料经过羰基化、溴化及吡咯醇胺基化，制备出吡咯环上连有羟基的亚甲基二氧吡咯戊酮，最后用丁二酸酐与吡咯环上羟基反应制得含有长臂羧基的半抗原。半抗原与蛋白偶联合成人工抗原：通过碳二酰亚胺催化的活性酯工艺，将半抗原与牛血清蛋白偶联制备出亚甲基二氧吡咯戊酮人工抗原。所制备的人工抗原可进行动物免疫，得到相应的抗体，用于各类亚甲基二氧吡咯戊酮免疫分析法的研究以及作为亚甲基二氧吡咯戊酮免疫层析试剂盒生产的关键原料。

技术领域

本发明属于生物化工及免疫检测技术领域，具体涉及一种亚甲基二氧吡咯戊酮人工抗原的制备方法。

背景技术

亚甲基二氧吡咯戊酮是一种卡西酮类的人工合成兴奋剂,分子式:C16H21NO3,英文名称：Methylenedioxypyrovalerone，简称MDPV，常以其盐酸盐形式存在，外观为白色至黄褐色的结晶粉末，有少许酮类微甜气味，易吸潮结块。结构式为：

亚甲基二氧吡咯戊酮和4-甲基甲卡西酮是新型毒品“浴盐”(Bath Salts)的两种主要成分，是化学合成的兴奋剂，对人体有相当的危害。“浴盐”并不是指某种特定的毒品，而是一类“策划药(designer drug)”或者叫合成兴奋剂，是被非法制造出来的，用以模拟具有精神活性等作用的合成药物。在国际社会对传统兴奋剂的严格管制之下，含有甲基苯丙胺和MDMA成分的迷幻药正逐渐退出毒品消费市场，卡西酮类和合成大麻类等新型毒品正成为滥用者娱乐时的新宠。

2012年5月26日，美国迈阿密一名裸体男子在公路堤道上攻击一名流浪汉，并啃掉他半张脸。警方称，凶手当时可能吸食了一种名为“浴盐”的新型街头毒品。这种新兴毒品“浴盐”外观与洗澡用的浴盐看似相同，容易易让食用者躲避掉警方检查。在美洲、欧洲、澳洲和东南亚一些国家，“浴盐”经常以“象牙色波浪”、“紫色波浪”、“香草天空”、“天赐之福”、“雄蜂”、“能量1号”、“红鸽子”、“雪豹等具有诱惑性的商品名出售，对青少年具有一定的诱惑力，近年来在一些狂欢聚会、酒吧及舞厅中吸食“浴盐”的青少年人数呈上升趋势。

滥用者娱乐时的“浴盐”的滥用方式为鼻吸和静脉注射，能产生出类似苯丙胺、MDMA、可卡因、阿拉伯茶和迷幻药(LSD)的效果，长期或大量服用亚甲基二氧吡咯戊酮可以形成依赖性。亚甲基二氧吡咯戊酮的药物不良反应有剧烈头痛、妄想、焦虑、惊厥、甚至忧郁症等。亚甲基二氧吡咯戊酮的急性效应包括:在生理上，可致心率加快、血压上升、血管

收缩、出汗等；在心理上，增加警觉和知觉、增加觉醒度、焦虑、激动、对食物和睡眠需要的感觉度减少。

亚甲基二氧吡咯戊酮，早在上世纪六十年代年就被人工合成，虽然没有发现其被FDA批准作为药物使用的历史记录，但是它曾被用于治疗慢性疲劳和厌食，直到2004年，它作为神经刺激性物质的作用才被逐渐重视起来。2008年之前，它主要在欧洲地区被滥用，欧盟在2010年12月宣布亚甲基二氧吡咯戊酮和甲基甲卡西酮是非法的。英国在2010年4月16日将MDPV列入B级管制药物。同年，芬兰、丹麦和瑞典将MDPV列为管制药物。美国缉毒署2011年11月21日将其列为第一类管制药物。澳大利亚在2012年2月11日将MDPV列入管制药物。加拿大也于2012年对MDPV发布禁令。在我国，亚甲基二氧吡咯戊酮还未被列为管制药物，也未批准作为药品上市。

目前，亚甲基二氧吡咯戊酮的分析检测主要依靠高效液相色谱法(HPLC),气相色谱(GC)，质谱(MS)等大型分析仪器。美国安捷伦公司开发出三重四极杆液质联用LC/MS/MS方法用于尿液“浴盐”成分亚甲基二氧吡咯戊酮(MDPV)和4-甲基甲卡西酮的分析检测；美国司法部缉毒署的特别测试与研究实验室也建立了气相色谱-质谱联用(GC/MS)的“浴盐”成分标准分析方法；国内许多药物和毒品机构也开发出MDPV分析检测方法，基本都是气相色谱和液相色谱与质谱联动的仪器分析方法。