[发明专利]一种单核细胞增多症的快速诊断试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种单核细胞增多症的快速诊断试剂盒，属于医疗检测领域。

背景技术

单核细胞增多症(Infectious mononucleosis)是由EBV病毒(一种接触传染性病毒，Epstein-Barr virus)所致的急性自限性传染病。其临床特征为发热，咽喉炎，肝脾淋巴结肿大，外周血淋巴细胞显著增多并出现异常淋巴细胞，嗜异性凝集试验阳性，感染后体内出现抗EBV抗体；青少年及年轻成年人较易发生(12到40岁)。

单核细胞增多症潜伏期在4-15天，成人可更长，起病急缓不一。约40％单核细胞增多症患者有前驱症状，历时4-5天，如全身不适、乏力、头痛、恶心、稀便、畏寒等，症状较典型，如不及时治疗还可能出现心血管系统、泌尿系统、呼吸系统等并发症，因此，对单核细胞增多症的早期诊断有助于该病的治疗，并减少并发症带来的身体伤害。

EBV病毒在健康人体中也有存在，因此不适于作为单核细胞增多症检测的指标，而其抗体因出现时间早、消失快、灵敏度和特异性高，已被广泛的应用于单核细胞增多症的早期诊断当中。

目前，采用酶联免疫吸附(ELISA)检测法检测血清/血浆中的EB抗体最为常用，已有商品化的试剂盒，在敏感性相同(88.3％)的前提下，ELISA法特异性(98.3％)明显优于IEA法(53.2％)。但ELISA法操作复杂、检测时间长，需要对待测样品进行稀释、温育、分离、洗涤和显色等操作，大概需要用两个小时以上。

发明内容

本发明提供一种单核细胞增多症的快速诊断试剂盒，其为在PVC板上顺次相互搭接经过处理的样品垫、吸附有稀土荧光微球标记的重组EBV早期抗原的结合垫、包被有检测线和质控线的硝酸纤维素膜和吸水垫，组装后形成的试纸卡。

在本发明的一个实施方案中，所述稀土荧光微球掺杂有铕元素；所述稀土荧光微球的直径为50-100nm。

在本发明另一个实施方案中，所述吸附荧光微球标记的重组EBV早期抗原的结合垫通过以下方法制备：

1)稀土荧光微球的活化；

2)稀土荧光微球标记的重组EBV早期抗原制备：

将重组EBV早期抗原与上述活化的稀土荧光微球混合，反应过夜；然后加入硼氢化钠反应；离心洗涤3遍，重悬于的pH7.6的100mM Tris-HCl缓冲液中(含0.05％叠氮钠、0.2％OVA(卵清白蛋白)和0.2％木质素磺酸钠)，4℃避光保存备用。

3)将玻璃纤维膜浸泡于含0.05％叠氮钠、1.5％木质素磺酸钠和0.5％OVA的100mM Tris-HCl缓冲液中，pH7.6；浸泡，然后取出并烘箱烘干，将玻璃纤维膜置于喷台上，用微定量喷头将稀土荧光微球标记的重组EBV早期抗原溶液喷到玻璃纤维膜，即得。

在本发明又一个实施方案中，所述包被有检测线和质控线的硝酸纤维素膜的制备方法如下：

用包被稀释液将鼠抗人IgA单克隆抗体和羊抗小鼠IgG抗体制成溶液，将它们分别作为检测线和质控线平行喷洒于硝酸纤维素膜上进行包被，然后置于烘箱中烘干。

在一个具体实施方案中，所述包被稀释液为含0.5％BSA和0.5％木质素磺酸钠的100mMTris-HCl缓冲液，pH7.4。

在本发明又一个实施方案中，所述样品垫的制备方法如下：

将玻璃纤维膜浸泡于0.25M Tris缓冲液(pH7.5)，含1.2％Triton X-100，2.5％BSA的处理液中，于4℃浸泡4个小时，然后置于烘箱中，37℃烘干4小时。

在本发明中，所述试纸卡的组装过程如下：在PVC板上依次粘贴经过处理的样品垫、吸附有稀土荧光微球标记的抗体的结合垫、包被有检测线和质控线的硝酸纤维素膜和吸水垫，组装后得到试纸大板，按照要求切割成4mm宽，将试纸装入塑料卡内形成试纸卡。

所述试剂盒，检测方法为：1)将检测试剂及样本平衡至室温，取出试纸卡，平放；2)精确吸取100μl血清样本，样本为全血时吸取150μl样本，加入到样本孔中，15-30分钟内用荧光免疫层析分析仪定量判定结果；3)设置好仪器相关参数后将试纸卡放入仓内进行检测，仪器将显示出样品浓度的定量测定结果。

在单核细胞增多症的快速诊断试剂盒的制备过程中，在喷涂液中添加了木脂素磺酸钠，其作为表面活性剂时，不仅抗体稳定性效果极佳，并且由于其配体作用导致对铕元素荧光微球发光强度随着时间延长没有出现减弱现象。另外，针对重组EBV早期抗原的稳定性，在结合垫制备过程中，添加了少量叠氮钠及OVA以保证重组EBV早期抗原的稳定。

具体实施方式