[发明专利]液相色谱-串联质谱法检测组织亚油酸含量的方法及结直肠癌诊断试剂盒

权利要求书

1.一种液相色谱-串联质谱法检测组织亚油酸含量的方法，其特征在于：包括以下步骤：

1)将50～110mg组织样本在液氮中研磨成粉，将研磨得到的组织粉末用含有0.1％2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚的冰甲醇均质后进行离心，取离心得到的上清液；

2)向15～20μL上清液中加入亚油酸同位素内标，放置25～35min后离心，将离心得到的上清液经氮气吹干后用50～60μL正丁醇于60～65℃衍生处理20～30min，然后氮气吹干，用100～150μL流动相重新分散溶解，得到待上样检测样品；

3)对待上样检测样品利用液相色谱-串联质谱法进行分析，得到组织样本中亚油酸的含量；

所述液相色谱的工作条件包括：流动相是将0.6～1mL 50％的乙酸水溶液与1000mL乙腈水溶液混合而制成的，所述乙腈水溶液中乙腈与水的体积比为(7～8):(2～3)；流动相采用梯度流速。

2.根据权利要求1所述一种液相色谱-串联质谱法检测组织亚油酸含量的方法，其特征在于：所述组织样本由肠道活检得到。

3.根据权利要求1所述一种液相色谱-串联质谱法检测组织亚油酸含量的方法，其特征在于：所述冰甲醇是指0～4℃预冷的甲醇。

4.根据权利要求1所述一种液相色谱-串联质谱法检测组织亚油酸含量的方法，其特征在于：所述液相色谱中初始流速为240μL/min；进样量为18～25μL。

5.根据权利要求1所述一种液相色谱-串联质谱法检测组织亚油酸含量的方法，其特征在于：所述质谱的工作条件包括：离子源温度为350～370℃；每次转变驻留时间为200～220ms；雾化气为0.3MPa，辅助气为0.4MPa，气帘气为0.25MPa；分析模式为母离子扫描，目标物亚油酸的母离子扫描范围为350～500m/z，子离子为85.1m/z。

6.一种结直肠癌诊断试剂盒，其特征在于：该试剂盒包括用于提取组织液的试剂以及用于制备液相色谱-串联质谱法所需样品的预处理试剂和流动相，所述用于提取组织液的试剂包括2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚以及甲醇，所述预处理试剂包括亚油酸同位素内标以及衍生试剂正丁醇；所述流动相是将0.6～1mL 50％的乙酸水溶液与1000mL乙腈水溶液混合而制成的，所述乙腈水溶液中乙腈与水的体积比为(7～8):(2～3)。

7.根据权利要求6所述一种结直肠癌诊断试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括用于实时定量PCR检测组织样本中FADS1、FADS2、ELOVL2或ELOVL5基因表达量的对应引物对P1、P2、P3或P4。

8.根据权利要求7所述一种结直肠癌诊断试剂盒，其特征在于：

所述引物对P1为：

上游引物FADS1F：5`-GTCCGCTTCTTCCTCACTTATG-3`

下游引物FADS1R：5`-GCTTTCCAGGAACCTGACTATG-3`；

所述引物对P2为：

上游引物FADS2F：5`-CATGACCATGATCGTCCATAAGA-3`

下游引物FADS2R：5`-GATGCCGTAGAAAGGGATGTAG-3`；

所述引物对P3为：

上游引物ELOVL2F：5`-CCCTTCGGTTGTCTCATCTTC-3`

下游引物ELOVL2R：5`-CAGGTGGCTCTTGCATATCTT-3`；

所述引物对P4为：

上游引物ELOVL5F：5`-TCCCTCTTGGTTGGTTGTATTT-3`

下游引物ELOVL5R：5`-CCTTCAGGTGGTCTTTCCTTC-3`。