[发明专利]一种从棉子糖乳球菌次级代谢物中分离活性化合物的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种从棉子糖乳球菌次级代谢物中分离活性化合物的方法，属于生物领域。

背景技术

天然产物是药物先导化合物发现的重要来源，近年来，越来越多的天然产物化学家把目光投向生物种类更加多样的微生物。

本发明从一株棉子糖乳球菌次级代谢物中分离出一种活性化合物，并通过优化培养条件，可以高效生产该化合物，成本低。经鉴定，该活性化合物具有显著的降血脂作用，还具有美白作用。

发明内容

本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明的一个目的在于提出从一株棉子糖乳球菌次级代谢物中分离出一种活性化合物，并通过优化培养条件，可以高效生产该化合物，成本低。经鉴定，该活性化合物具有显著的降血脂作用，还具有美白作用。

本发明人从广东微生物保藏中心购得一株棉子糖乳球菌，其编号为：GIM1.1015，根据保藏中心的记载，该菌株的其他编号为：JCM 5706。＝ATCC 43920＝CGMCC 1.1935＝DSM 20443＝NBRC 100932。

对该株棉子糖乳球菌进行培养，在MRS液体培养基中培养24-72h，共发酵100L。过滤、浓缩后得到水相10L，用乙酸乙酯进行萃取，减压浓缩后得到乙酸乙酯层浸膏20g，经300目硅胶柱层析，二氯甲烷-甲醇(3:1-1:2)梯度洗脱，合并相同组分，各组分再经反复硅胶层析，Sephadex LH-20和RP-18反相柱色谱分离纯化以及C₁₈高效液相制备得两种化合物，1(3.5mg)、化合物2(8.1mg)

经鉴定，化合物1的结构式为：

本发明人还惊讶地发现，该活性化合物具有显著的降血脂作用，还具有美白作用。

本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。

本发明的有益之处在于：

本发明从一株棉子糖乳球菌次级代谢物中分离出一种活性化合物，并通过优化培养条件，可以高效生产该化合物，成本低。经鉴定，该活性化合物具有显著的降血脂作用，还具有美白作用。

附图说明

图1为黑色素代谢原理图。

具体实施方式

下面详细描述本发明的实施例，所述实施例仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。

实施例1：

本发明人从广东微生物保藏中心购得一株棉子糖乳球菌，其编号为：GIM1.1015，根据保藏中心的记载，该菌株的其他编号为：JCM 5706。＝ATCC 43920＝CGMCC 1.1935＝DSM 20443＝NBRC 100932。

对该株棉子糖乳球菌进行培养，在MRS液体培养基中培养24-72h，共发酵100L。过滤、浓缩后得到水相10L，用乙酸乙酯进行萃取，减压浓缩后得到乙酸乙酯层浸膏20g，经300目硅胶柱层析，二氯甲烷-甲醇(3:1-1:2)梯度洗脱，合并相同组分，各组分再经反复硅胶层析，Sephadex LH-20和RP-18反相柱色谱分离纯化以及C18高效液相制备得两种化合物，化合物1(3.5mg)、化合物2(8.1mg)

经鉴定，化合物1为淡黄色粉末，溶于二氯甲烷，分子式为C₁₃H₁₄O₃；mp.60摄氏度，化合物1的结构式为：

其核谱数据如下所示：

经检索核实，和已知文献报告过的化合物一致(天然产物研究与开发Nat ProdRes Dev 2014，26:159-161)，但是该文献没有对该化合物的功能进行研究。

实施例2：

本发明人对实施例1的发酵方法进行改进，发现可以大幅提高该化合物的产量，为低成本工业化生产提供了可能性。

本发明基于如下发现：特定浓度范围的甘草查尔酮B配合特定的温度曲线，可以令人惊讶地大幅提高该化合物的产量。甘草查尔酮B购自上海丽臣公司，纯度＞98％。

从广东微生物保藏中心购得一株棉子糖乳球菌，其编号为：GIM 1.1015，根据保藏中心的记载，该菌株的其他编号为：JCM 5706。＝ATCC 43920＝CGMCC1.1935＝DSM 20443＝NBRC 100932。

对该株棉子糖乳球菌进行培养，接种进modified-MRS液体培养基中培养48h：前18h保持35摄氏度；第19-22h保持18摄氏度，第23-48h保持30摄氏度培养；