[发明专利]微生物的识别方法

说明书

一种微生物的识别方法，其特征在于，具有：对含有微生物的试样进行质量分析从而得到质谱的步骤；从所述质谱读取源自标记蛋白质的峰的质荷比m/z的步骤；识别步骤，基于所述质荷比m/z对所述试样所含的微生物含有弯曲菌属菌的哪一个菌种进行识别，使用18种标记蛋白质S10、L23、S19、L22、L16、L29、S17、L14、L24、S14、L18、L15、L36、S13、S11(Me)、L32、L7/L12中的至少一种作为所述标记蛋白质。

技术领域

本发明涉及利用了质量分析的微生物的识别方法。

背景技术

弯曲菌(Campylobacter)属菌是微需氧性无芽胞的革兰氏阴性螺旋状杆菌，目前报道有33个菌种(非专利文献1)。本属细菌中的胎儿弯曲菌(Campylobacter fetus)，虽然从大约100多年前作为造成家畜流产的细菌而熟知，但是目前，空肠弯曲菌(Campylobacterjejuni)、大肠弯曲菌(Campylobaefer coli)作为造成人类的弯曲菌感染症的细菌而备受关注。在较多的发达国家,弯曲菌感染症具有增加的倾向(非专利文献2)，并引起作为并发症的格林巴利综合征或费希尔氏综合征等的末梢神经炎。

弯曲菌属菌的增殖时间较慢，是一般细菌的大约两倍，在37℃下以40～50分钟增殖。此外，在pH5.5～8.0下进行增殖。虽然本属菌在有氧条件的室温下2～3日即死亡，但是在10℃以下即便是有氧条件也可生存相当长的时间。此外，在以-20℃以下的温度冻结的生肉或真空包装以及惰性气体置换包装后的包装生肉中也能够生存1个月以上。虽然本属菌的大多数的种的最适发育温度为30～37℃，但也存在在25℃下发育的菌种与在42℃下发育的菌种。在42℃下发育的菌种被称为“嗜热弯曲菌(Thermophilic Campylobacter)”，与食物中毒有关系的菌种属于该菌种。

弯曲菌属菌大多广泛地分布在家畜、家禽、宠物以及野生动物的肠管中，并且被认为是来自这些动物的细菌是从河川或湖水、甚至下水道等分离的(非专利文献3)。在发达国家中被最为重视感染源的是鸡，鸡肉的污染率与其他的牲畜肉相比非常高(非专利文献5)。根据国内外的调查，在鸡中不会发生垂直感染，而是通过水平感染在短时间内蔓延。还报道了从候鸟到家禽的传播(非专利文献4、5)。

在空肠弯曲菌和大肠弯曲菌的流行病学调查中，虽然两种血清分型法(Penner型和Lior型)被广泛地使用(非专利文献6、7)，但是Penner型诊断用血清只在有限的机构配备，并且Lior型的血清分型法花费时间。

由于上述情况，空肠弯曲菌、大肠弯曲菌作为食物中毒菌必须在食品以及医疗领域进行管理，并且有必要开发迅速的检测以及鉴定识别技术。

至今为止报道有m-PCR(非专利文献8、9)、脉冲场凝胶电泳(非专利文献10)、多位点序列分型(非专利文献11、12)等。然而，这些方法存在需要繁琐的操作，并且花费时间的问题。

另一方面，近年来根据基质辅助激光解吸电离飞行时间质量分析法(MALDI-TOFMS)对微生物进行鉴定的技术，在临床以及食品领域急速地普及。本方法是基于使用极微量的食物试样得到的质谱图谱进行微生物鉴定的方法，能够在短时间内得到分析结果，并且容易对多个被检体进行连续分析，因此能够简便并且迅速地进行微生物鉴定。