[发明专利]标记的核苷酸类似物、反应混合物以及测序方法和系统

权利要求书

1.一种标记的核苷酸类似物，其包含：

第一亲和素蛋白，其具有四个亚基，各亚基包含一个生物素结合位点；

第一核苷酸化合物，其结合至所述第一亲和素蛋白，其中所述第一核苷酸化合物由结构式(I)表示：

其中

L为包括亲合力调节元件的核苷酸接头元件，其中L包括取代或未取代的烷基、杂烷基、环烷基、环杂烷基、芳基、杂芳基、多元醇、聚醚、聚胺、氨基酸、肽或糖，并且其中所述亲合力调节元件包括取代或未取代的单环、双环或三环芳香族部分；

P为多磷酸酯元件；

Nu为核苷元件；

X为多价中央核心元件，其中X包括多胺、取代的环己烷、取代的1,3,5-三嗪、取代的苯、醚键部分或酰基键部分；

B”为末端偶联元件，其中至少一个B”包含生物素部分；

n为1至4的整数；并且

o为0或1；以及

第一染料标记的化合物，其结合至所述第一亲和素蛋白，其中所述第一染料标记的化合物为结构式(IIIG)的化合物：

其中

各L’独立地为染料化合物接头元件，其中L’包括取代或未取代的烷基、杂烷基、环烷基、环杂烷基、芳基、杂芳基、多元醇、聚醚、聚胺、氨基酸、肽或糖；

各S独立地为防护元件，其中S包含多个分子量为至少300的多个侧链；

各Dye独立地为荧光受体染料或荧光供体染料，其中所述荧光受体染料和荧光供体染料独立地为荧光素、罗丹明类染料、或花青染料；

各B”独立地为末端偶联元件，其中至少一个B”包含生物素部分；

各p独立地为0或1；并且

各r”独立地为0至8的整数；

s为1至6的整数；并且

t为0或1。

2.根据权利要求1所述的标记的核苷酸类似物，其中所述第一染料标记的化合物和所述第一核苷酸化合物各自通过生物素部分结合至所述第一亲和素蛋白。

3.根据权利要求1所述的标记的核苷酸类似物，其还包含第二亲和素蛋白和第二核苷酸化合物，其中

所述第二亲和素蛋白通过生物素部分结合至所述第一染料标记的化合物，并且所述第二亲和素蛋白通过生物素部分结合至所述第二核苷酸化合物。

4.根据权利要求1所述的标记的核苷酸类似物，其中所述第一亲和素蛋白为亲和素、链霉亲和素、蘑菇亲和素、链霉亲和素突变体、热带爪蟾亲和素、慢生大豆根瘤菌亲和素、AVR2、AVR4或它们的同源物。

5.根据权利要求1所述的标记的核苷酸类似物，其中所述亲和力调节元件由结构式(II)表示：

其中

A环和B环各自独立地为5个至7个原子的环状结构，其中A环或B环的至少一者为芳香族；并且

A环或B环任选地包含至少一个阴离子取代基。

6.根据权利要求5所述的标记的核苷酸类似物，其中任选的至少一个阴离子取代基为-SO₃H。

7.根据权利要求5所述的标记的核苷酸类似物，其中所述亲和力调节元件由结构式(IIA)或(IIB)表示：

其中

A₁、A₂、A₃和A₄基团中的一者为并且其他基团为-CH₂-或键；并且

R₁为H或阴离子取代基并且R₂为H或阴离子取代基。

8.根据权利要求7所述的标记的核苷酸类似物，其中所述阴离子取代基为-SO₃H。

9.根据权利要求7所述的标记的核苷酸类似物，其中所述亲和力调节元件由结构式(IIC)或(IIC’)表示：

10.根据权利要求7所述的标记的核苷酸类似物，其中所述亲和力调节元件由下列结构式中的一者表示：