[发明专利]用于治疗恶性实体肿瘤的减毒细菌

权利要求书

1.重组减毒革兰氏阴性细菌菌株在制备药物或试剂盒中的用途，所述药物或试剂盒与铁载体组合用于治疗受试者的恶性实体肿瘤，

其中所述重组减毒革兰氏阴性细菌菌株是耶尔森氏菌（Yersinia），其在铁载体产生方面有缺陷并且在至少细菌效应蛋白YopE、YopH、YopM、YopO、YopP和YopT的生产方面有缺陷并且用如下载体转化，所述载体按5’至3’方向包含：

启动子；

编码来自细菌效应蛋白的递送信号的第一DNA序列，其可操作地连接至所述启动子，其中递送信号包含YopE效应蛋白或其N末端片段，其中所述N末端片段至少包括或者为YopE效应蛋白的N-末端的52个氨基酸；

编码异源蛋白的第二DNA序列，其与所述第一DNA序列的3’末端框内融合，

或者

所述重组减毒革兰氏阴性细菌菌株是沙门氏菌，其在铁载体产生方面有缺陷并且在至少细菌效应蛋白SopE，SopB和SptP的生产方面有缺陷并且用如下载体转化，所述载体按5’至3’方向包含：

启动子；

编码来自细菌效应蛋白的递送信号的第一DNA序列，其可操作地连接至所述启动子，其中所述递送信号包含SopE或SteA效应蛋白或SopE效应蛋白的N末端片段，其中所述SopE效应蛋白的N末端片段至少包括或者为SopE效应蛋白的N末端81个氨基酸；

编码异源蛋白的第二DNA序列，其与所述第一DNA序列的3’末端框内融合，

其中铁载体选自去铁胺，去铁敏E、地拉罗司和去铁酮，其中所述重组减毒革兰氏阴性细菌菌株在恶性实体肿瘤中积聚，并且其中所述异源蛋白选自由以下组成的组：参与细胞凋亡或细胞凋亡调节的蛋白、锚蛋白重复蛋白、纳米抗体融合构建体和纳米抗体。

2.根据权利要求1所述的用途，其中所述重组减毒革兰氏阴性细菌菌株是小肠结肠炎耶尔森氏菌（Y. enterocolitica）或肠炎沙门氏菌(S.enterica)。

3.根据权利要求1所述的用途，其中所述重组减毒革兰氏阴性细菌菌株在对真核细胞有毒力的所有细菌效应蛋白的生产方面有缺陷。

4.根据权利要求1所述的用途，其中所述重组减毒革兰氏阴性细菌菌株是突变的耶尔森氏菌菌株，在突变的耶尔森氏菌菌株中，编码对真核细胞有毒力的细菌效应蛋白的所有效应子编码基因均被突变，使得所得耶尔森氏菌不再产生对真核细胞有毒力的任何功能性细菌效应蛋白；或者所述重组减毒革兰氏阴性细菌菌株是突变的沙门氏菌菌株，在突变的沙门氏菌菌株中，编码对真核细胞有毒力的细菌效应蛋白的所有效应子编码基因均被突变，使得所得沙门氏菌不再产生对真核细胞有毒力的任何功能性细菌效应蛋白。

5.根据权利要求1所述的用途，其中YopE是小肠结肠炎耶尔森氏菌YopE效应蛋白，或所述SteA效应蛋白是肠炎沙门氏菌SteA效应蛋白，或所述SopE效应蛋白为肠炎沙门氏菌SopE效应蛋白。

6.根据权利要求1所述的用途，其中所述YopE效应蛋白的N-末端片段至少包括或者为YopE效应蛋白的N-末端的80个氨基酸。

7.权利要求1的用途，其中所述YopE效应蛋白的N-末端片段至少包括或者为YopE效应蛋白的N-末端的138个氨基酸。

8.权利要求1的用途，其中所述SopE效应蛋白的N末端片段至少包括或者为SopE效应蛋白的N末端105个氨基酸。

9.根据权利要求1所述的用途，其中所述异源蛋白选自参与细胞凋亡或细胞凋亡调节的蛋白、纳米抗体融合构建体和纳米抗体。

10.根据权利要求1所述的用途，其中所述异源蛋白选自参与细胞凋亡或细胞凋亡调节的蛋白。

11.根据权利要求1所述的用途，其中所述重组减毒革兰氏阴性细菌菌株在对真核细胞有毒力的所有效应蛋白的生产方面有缺陷，并且所述重组减毒革兰氏阴性细菌菌株表达前药转化酶。