[发明专利]获得和校正生物序列信息的方法

权利要求书

1.一种用于获得目标多核苷酸的序列信息的方法，所述方法包括：

a)在第一多核苷酸复制催化剂存在下向目标多核苷酸提供第一测序试剂，其中所述第一测序试剂包含各自缀合于第一标记的至少两种不同的核苷酸单体，并且所述核苷酸单体/第一标记缀合物直到根据与所述目标多核苷酸的互补性将所述核苷酸单体掺入所述目标多核苷酸之后基本上是非荧光的，其中所述至少两种不同的核苷酸单体的所述第一标记相同或不同；和

b)在第二多核苷酸复制催化剂存在下向所述目标多核苷酸提供第二测序试剂，其中所述第二测序试剂包含各自缀合于第二标记的一种或多种核苷酸单体，并且所述核苷酸单体/第二标记缀合物直到根据与所述目标多核苷酸的互补性将所述核苷酸单体掺入所述目标多核苷酸之后基本上是非荧光的，所述一种或多种核苷酸单体中的至少一种不同于所述第一测序试剂中存在的所述核苷酸单体，并且其中所述第二测序试剂是在提供了所述第一测序试剂随后提供的，和

c)通过在所述步骤a)和b)中将所述核苷酸单体掺入所述多核苷酸之后检测所述第一标记和第二标记导致的荧光发射，获得至少部分所述目标多核苷酸的序列信息。

2.根据权利要求1所述的方法，其用于获得至少部分单个目标多核苷酸的序列信息，或用于同时获得至少部分多种目标多核苷酸的序列信息。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述第一多核苷酸复制催化剂和所述第二多核苷酸复制催化剂是相同的多核苷酸复制催化剂，或其中所述第一多核苷酸复制催化剂和所述第二多核苷酸复制催化剂是不同的多核苷酸复制催化剂。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中通过一次或多次测序反应获得所述序列信息，其中可选地，所述一次或多次测序反应在一个或多个反应体积(例如反应室)中进行，例如约1×10⁶至约5×10⁸个反应体积、约1×10⁶至约1×10⁸个反应体积或约1×10⁶至约5×10⁷个反应体积，其中任选地，所述反应体积彼此物理分开和/或所述反应体积之间基本上没有物料交换，其中可选地所述反应体积位于阵列如芯片中，并且其中任选地，所述反应体积是封闭的和/或由与所述反应体积中的液体不互溶的液体例如油彼此隔离。

5.根据权利要求4所述的方法，其中在反应室中提供所述反应体积，并且每个所述反应室中的所述目标多核苷酸被固定化于所述反应室中的固体载体上，其中任选地所述序列信息通过高通量测序获得，例如，其中至少约10³、10⁴、10⁵、10⁶、10⁷、10⁸或10⁹条序列基本上并行读取。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中所述第一多核苷酸复制催化剂和/或所述第二多核苷酸复制催化剂为聚合酶，例如DNA聚合酶、RNA聚合酶或RNA依赖性RNA聚合酶、连接酶、逆转录酶或末端脱氧核糖核苷转移酶。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所述第一和/或所述第二测序试剂中的所述核苷酸单体选自由以下组成的组：脱氧核糖核苷酸、修饰的脱氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、修饰的核糖核苷酸、肽核苷酸、修饰的肽核苷酸、修饰的磷酸糖主链核苷酸及其混合物。

8.根据权利要求7所述的方法，其中所述第一测序试剂和所述第二测序试剂中的所述核苷酸单体均为脱氧核糖核苷酸。

9.根据权利要求8所述的方法，其中所述核苷酸单体选自由以下组成的组：A、T/U、C和G脱氧核糖核苷酸，及其类似物。

10.根据权利要求7所述的方法，其中所述第一测序试剂和所述第二测序试剂中的所述核苷酸单体均为核糖核苷酸。