[发明专利]电荷逆转的N端蜘蛛丝蛋白结构域及其用途

权利要求书

1.一种蛋白部分，所述蛋白部分的序列为SEQ ID NO：2。

2.一种融合蛋白，所述融合蛋白包含：

(i)至少一个根据权利要求1所述的蛋白部分；和

(ii)至少一个期望的蛋白或多肽的部分。

3.根据权利要求2所述的融合蛋白，还包含：

(iii)至少一个设置在所述至少一个期望的蛋白或多肽的部分与所述至少一个根据权利要求1所述的蛋白部分之间的裂解位点。

4.至少一个如权利要求1中所定义的蛋白部分作为融合蛋白中的部分用于增强所述融合蛋白中的另一部分的溶解度的用途，所述融合蛋白中的另一部分是期望的蛋白或多肽。

5.一种制备包含期望的蛋白或多肽的融合蛋白的方法，所述方法包括以下步骤：

a)在合适的宿主中表达根据权利要求2-3的任一项所述的包含期望的蛋白或多肽的融合蛋白；和

b)获得包含所述融合蛋白的混合物。

6.一种制备期望的蛋白或多肽的方法，所述方法包括以下步骤：

a)在合适的宿主中表达根据权利要求3所述的包含期望的蛋白或多肽的融合蛋白；

b)获得包含所述融合蛋白的混合物；和

c)裂解所述融合蛋白作为裂解产物以从残余的溶解度增强部分或其片段释放所述期望的蛋白或多肽。

7.根据权利要求6所述的方法，其中步骤c)包括以下步骤：

c1)分离所述期望的蛋白或多肽。

8.根据权利要求5-7的任一项所述的方法，其中步骤b)包括以下步骤：

b1)分离所述融合蛋白。

9.根据权利要求7所述的方法，条件是，所述方法不包括涉及凝胶过滤、色谱法或任何其他基于固相吸附的分离的任何分离步骤。

10.根据权利要求8所述的方法，条件是，所述方法不包括涉及凝胶过滤、色谱法或任何其他基于固相吸附的分离的任何分离步骤。

11.根据权利要求8所述的方法，其中步骤b1)分离所述融合蛋白包括以下步骤：

b1a)使所述融合蛋白沉淀；和

b1b)将沉淀的融合蛋白悬浮在水性溶剂中，其中所述融合蛋白在所述水性溶剂中是可溶性的。

12.根据权利要求7所述的方法，其中步骤c1)分离所述期望的蛋白或多肽包括：

c1b)通过将所述裂解产物悬浮在有机溶剂中来提取所述期望的蛋白或多肽；其中所述期望的蛋白或多肽在有机溶剂中是可溶性的；并且其中所述残余的溶解度增强部分或其片段在有机溶剂中是不溶性的。

13.根据权利要求12所述的方法，其中步骤c1b)的所述有机溶剂包括甲醇、乙醇或异丙醇。

14.根据权利要求12-13的任一项所述的方法，其中步骤c1)分离所述期望的蛋白或多肽在所述提取步骤c1b)之前还包括以下步骤：

c1a)使所述裂解产物沉淀。

15.根据权利要求11所述的方法，其中至少一个沉淀步骤包括在高盐浓度的盐析。

16.根据权利要求14所述的方法，其中至少一个沉淀步骤包括在高盐浓度的盐析。

17.根据权利要求5-7的任一项所述的方法，其中步骤b)中获得的所述混合物包含所述融合蛋白的胶束。

18.根据权利要求2-3的任一项所述的融合蛋白的胶束。