[发明专利]肝细胞的生产方法有效
| 申请号： | 201680077299.8 | 申请日： | 2016-10-29 |
| 公开（公告）号： | CN108884438B | 公开（公告）日： | 2022-12-23 |
| 发明（设计）人： | 路易丝·克里斯蒂娜·哈格巴德;卡尔·贡纳尔·杰斯珀·爱立信;凯瑟琳·雷切尔·卡梅伦;大卫·科林·海伊;斯图尔特·约翰·福布斯;哈桑·拉希迪 | 申请（专利权）人： | 拜奥拉米那公司;爱丁堡大学 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071 |
| 代理公司： | 北京天昊联合知识产权代理有限公司 11112 | 代理人： | 麦善勇;张天舒 |
| 地址： | 瑞典斯*** | 国省代码： | 暂无信息 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 肝细胞 生产 方法 | ||
1.一种生产肝细胞的方法，包括：
在细胞培养基底上接种人多能干细胞，所述细胞培养基底包含(i)第一层粘连蛋白，其为层粘连蛋白-521以及(ii)第二层粘连蛋白，其为层粘连蛋白-221，其中所述层粘连蛋白-521和所述第二层粘连蛋白各自为完整蛋白质；和
培养所述人多能干细胞以得到肝细胞。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述层粘连蛋白-521与所述第二层粘连蛋白的重量比为1:4至1:1。
3.根据权利要求1所述的方法，其中所述人多能干细胞的培养通过以下步骤进行：
在含有活化素A和Wnt3a的内胚层分化培养基中培养所述细胞；
在成肝细胞分化培养基中培养所述细胞；以及
在含有氢化可的松(HC)、肝细胞生长因子(HGF)和制瘤素m(OSM)的肝细胞成熟培养基中培养所述细胞。
4.根据权利要求3所述的方法，其中将所述细胞在所述内胚层分化培养基中培养60小时至84小时。
5.根据权利要求3所述的方法，其中将所述细胞在所述成肝细胞分化培养基中培养73小时至180小时。
6.根据权利要求3所述的方法，其中将所述细胞在所述肝细胞成熟培养基中培养至少216小时。
7.根据权利要求3所述的方法，其中所述内胚层分化培养基中的所述活化素A的含量为50ng/mL至150ng/mL。
8.根据权利要求3所述的方法，其中所述内胚层分化培养基中的所述Wnt3a的含量为20ng/mL至100ng/mL。
9.根据权利要求3所述的方法，其中所述内胚层分化培养基包含RPMI 1640和B27。
10.根据权利要求3所述的方法，其中所述成肝细胞分化培养基由KO-DMEM、20％的血清替代物、1％的非必需氨基酸、0.1mM的β-巯基乙醇和1％的二甲基亚砜制成。
11.根据权利要求3所述的方法，其中所述肝细胞成熟培养基中的所述肝细胞生长因子的含量为5ng/mL至20ng/mL。
12.根据权利要求3所述的方法，其中所述肝细胞成熟培养基中的所述制瘤素m的含量为10ng/mL至30ng/mL的量。
13.根据权利要求1所述的方法，其中根据Avior方案对所述人多能干细胞进行所述培养，其中所述Avior方案为使用内胚层分化培养基、肝特化培养基、肝分化培养基和肝成熟培养基进行所述培养。
14.根据权利要求1所述的方法，其中根据Cameron方案对所述人多能干细胞进行所述培养，其中所述Cameron方案为使用内胚层分化培养基、成肝细胞分化培养基和肝细胞成熟培养基进行所述培养。
15.根据权利要求1所述的方法，其中所得的肝细胞显示至少600,000RLU/mg/mL的CYP1A2活性。
16.根据权利要求1所述的方法，其中所得的肝细胞显示至少800,000RLU/mg/mL的CYP3A活性。
17.根据权利要求1所述的方法，其中所述细胞培养基底还包含钙粘蛋白。
18.根据权利要求17所述的方法，其中第一层粘连蛋白+第二层粘连蛋白与所述钙粘蛋白的重量比为5:1至15:1。
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