[发明专利]增强的蛋白质表达及其方法

权利要求书

1.一种用于在地衣芽孢杆菌(B.licheniformis)细胞中增加目的蛋白的表达的方法，其包括：

(a)获得一种表达增加量的目的蛋白的经修饰的地衣芽孢杆菌细胞，其中所述经修饰的地衣芽孢杆菌细胞包含编码变体RNA聚合酶β'-亚基多肽的rpoC基因，其中变体RNA聚合酶β'-亚基多肽与SEQ ID NO:6或8的区别在于SEQ ID NO:6或8的氨基酸残基位置796处的天冬氨酸取代为甘氨酸，和

(b)在表达所述目的蛋白的条件下培养所述经修饰的细胞，

其中所述表达增加量的目的蛋白的经修饰的地衣芽孢杆菌细胞是相对于未经修饰的地衣芽孢杆菌细胞中目的蛋白的表达而言的。

2.如权利要求1所述的方法，其中编码变体β'-亚基多肽的rpoC基因插入到经修饰的细胞的染色体中。

3.如权利要求1所述的方法，其中编码变体β'-亚基多肽的rpoC基因包含在经修饰的细胞的染色体外质粒中。

4.权利要求1或2所述的方法，其中所述编码变体β'-亚基多肽的所述rpoC基因衍生自野生型rpoC基因或其变体，所述rpoC基因与SEQ ID NO:5或7具有至少80％的序列同一性。

5.权利要求1或2所述的方法，其中相对于所述未经修饰的地衣芽孢杆菌细胞，所表达的目的蛋白的增加量为至少10％。

6.权利要求1或2所述的方法，其中所述目的蛋白选自：乙酰酯酶、氨肽酶、淀粉酶、阿拉伯糖酶、阿拉伯呋喃糖苷酶、碳酸酐酶、羧肽酶、过氧化氢酶、纤维素酶、几丁质酶、凝乳酶、角质酶、脱氧核糖核酸酶、差向异构酶、酯酶、α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶、α-葡聚糖酶、葡聚糖裂解酶、内切-β-葡聚糖酶、葡糖淀粉酶、葡萄糖氧化酶、α-葡糖苷酶、β-葡糖苷酶、葡萄糖醛酸酶、糖基水解酶、半纤维素酶、己糖氧化酶、水解酶、转化酶、异构酶、漆酶、脂肪酶、裂解酶、甘露糖苷酶、氧化酶、氧化还原酶、果胶酸裂解酶、果胶乙酰酯酶、果胶解聚酶、果胶甲酯酶、果胶分解酶、过水解酶、多元醇氧化酶、过氧化物酶、酚氧化酶、植酸酶、聚半乳糖醛酸酶、蛋白酶、肽酶、鼠李糖-半乳糖醛酸酶、核糖核酸酶、转移酶、转运蛋白、转谷氨酰胺酶、木聚糖酶、及其组合。

7.权利要求1或2所述的方法，其中所述地衣芽孢杆菌宿主细胞进一步包含至少一个拷贝的引入的第二核酸构建体，所述引入的第二核酸构建体包含启动子区域5'并且与编码ComK多肽的多核苷酸有效地连接以使所述宿主细胞更具感受态。

8.一种相对于未经修饰的地衣芽孢杆菌细胞表达增加量的目的蛋白的经修饰的地衣芽孢杆菌细胞，其中所述地衣芽孢杆菌细胞在编码变体RNA聚合酶β'-亚基多肽的rpoC基因中包含在SEQ ID NO:6或8的氨基酸残基位置796处的天冬氨酸至甘氨酸的取代D796G，其中目的蛋白由选自以下的与芽孢杆菌属细胞异源的基因编码：乙酰酯酶、氨肽酶、淀粉酶、阿拉伯糖酶、阿拉伯呋喃糖苷酶、碳酸酐酶、羧肽酶、过氧化氢酶、纤维素酶、几丁质酶、凝乳酶、角质酶、脱氧核糖核酸酶、差向异构酶、酯酶、α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶、α-葡聚糖酶、葡聚糖裂解酶、内切-β-葡聚糖酶、葡糖淀粉酶、葡萄糖氧化酶、α-葡糖苷酶、β-葡糖苷酶、葡萄糖醛酸酶、糖基水解酶、半纤维素酶、己糖氧化酶、水解酶、转化酶、异构酶、漆酶、脂肪酶、裂解酶、甘露糖苷酶、氧化酶、氧化还原酶、果胶酸裂解酶、果胶乙酰酯酶、果胶解聚酶、果胶甲酯酶、果胶分解酶、过水解酶、多元醇氧化酶、过氧化物酶、酚氧化酶、植酸酶、聚半乳糖醛酸酶、蛋白酶、肽酶、鼠李糖-半乳糖醛酸酶、核糖核酸酶、转移酶、转运蛋白、转谷氨酰胺酶、木聚糖酶、及其组合。

9.权利要求8所述的经修饰的地衣芽孢杆菌细胞，其中所述rpoC基因衍生自野生型rpoC基因或其变体，所述rpoC基因与SEQ ID NO:5或7具有至少80％的序列同一性。