[发明专利]用于基因编辑的组合物和方法

权利要求书

1.一种修饰靶核酸的方法，包括在约10℃至约60℃的温度下使所述靶核酸与Argonaute(Ago)蛋白和单链引导DNA接触，其中所述Ago蛋白和所述引导DNA形成特异性识别所述靶核酸中的靶基因座的复合物，并且其中所述靶基因座包含与所述引导DNA的序列互补的序列。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述Ago蛋白切割所述靶基因座。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述靶基因座是双链DNA，并且其中所述Ago蛋白诱导所述靶基因座的双链断裂。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述温度为约37℃。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述Ago蛋白和所述引导DNA存在于预形成的复合物中。

6.根据权利要求5所述的方法，其中在低于约50℃的温度下所述引导DNA不与所述Ago蛋白解离。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所述靶基因座的序列包含对所述引导DNA的序列的不超过约3个错配。

8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所述靶基因座具有至少约60％的GC含量。

9.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其中所述Ago蛋白来源于选自以下的生物体：格氏嗜盐碱杆菌(Natronobacterium gregoryi)、铜绿微囊藻(Microcystisaeruginosa)、Halogeometricum pallidum、亚洲嗜盐碱杆菌(Natrialba asiatica)、西藏嗜盐碱红菌(Natronorubrum tibetense)、隐红碱线菌(Natrinema pellirubrum)、伯林盐几何菌(Halogeometricum borinquense)、Thermococcus barophilus、嗜热聚球藻(Thermosynechococcus elongatus)、嗜冷嗜盐菌(Halorubrum lacusprofundi)、微囊藻属(Microcystis sp.)、聚球藻属(Synechococcus sp.)、梭菌属(Clostridium bartlettii)、产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)、煎盘梭菌(Clostridium sartagoforme)、梭菌属(Clostridium sp.)、Intestinibacter bartlettii、嗜热古菌(Ferroglobusplacidus)、盐杆菌属(Halobacterium sp.)、Methanocaldococcus fervens、浅黄假单胞菌(Pseudomonas luteola)、Thermogladius cellulolyticus、固氮弧菌属物种(Aromatoleumaromaticum)、深海超嗜热古菌(Thermococcus onnurineus)、坎式甲烷火菌(Methanopyruskandleri)、细长聚球藻(Synechococcus elongatus)、好热黄无氧芽孢菌(Anoxybacillusflavithermus)、微小杆菌属(Exiguobacterium sp.)、鞘丝藻属(Lyngbya sp.)、丁酸梭菌(Clostridium butyricum)、Halorubrum kocurii、Burkholderiaambifaria、草根围伯克霍尔德氏菌(Burkholderia graminis)、死海盐盒菌(Haloarcula marismortui)、百脉根中慢生根瘤菌(Mesorhizobium loti)、红细菌目细菌(Rhodobacterales bacterium)和解肝磷酯土地杆菌(Pedobacter heparinus)。

10.根据权利要求9所述的方法，其中所述Ago蛋白来源于格氏嗜盐碱杆菌。