[发明专利]对用于产生能生育的XY雌性小鼠的多能细胞的选择

权利要求书

1.一种用于在小鼠XY胚胎干(ES)细胞中筛选具有雌性化活性的靶标化合物的方法，包括：

(a)在包含基础培养基和适于维持所述小鼠XY ES细胞的多能性但不改变所述小鼠XYES细胞产生能生育雌性子代的能力的补充物的培养基中培养第一群体的小鼠XY ES细胞和第二群体的小鼠XY ES细胞，其中在靶标化合物存在下培养所述第一群体，并且在不存在所述靶标化合物下培养所述第二群体；以及

(b)测定所述第一群体的小鼠XY ES细胞和所述第二群体的小鼠XY ES细胞的每一个中的一个或多个所述小鼠XY ES细胞的Ddx3y、Uty和Eif2s3y中的一者或多者的表达，借此通过相较于来自所述第二群体的所述一个或多个小鼠XY ES细胞，来自所述第一群体的所述一个或多个小鼠XY ES细胞中的Ddx3y、Uty和Eif2s3y中的所述一者或多者的表达的至少90％的降低来鉴定雌性化活性，且其中所述雌性化活性导致所述小鼠XY ES细胞在F0代中产生能生育的呈表型雌性的XY小鼠的倾向增加。

2.如权利要求1所述的方法，其进一步包括：

(c)基于与来自所述第二群体的一个或多个小鼠XY ES细胞相比，来自所述第一群体的一个或多个小鼠XY ES细胞中的Ddx3y、Uty和Eif2s3y中的所述一者或多者的表达的至少90％的降低来从所述第一群体选择用于在F0代中产生能生育的呈表型雌性的XY小鼠的供体小鼠XY ES细胞，其中所述能生育的呈表型雌性的XY小鼠在所述F0代中的比例与Ddx3y、Uty和Eif2s3y中的所述一者或多者的表达和/或活性逆相关。

3.如权利要求2所述的方法，其中所述方法进一步包括：

(d)将所述供体小鼠XY ES细胞引入小鼠宿主胚胎中；

(e)将来自步骤(d)的所述小鼠宿主胚胎引入接受者雌性小鼠中以及孕育所述小鼠宿主胚胎；和

(f)获得包括呈表型雌性的XY小鼠的F0 XY小鼠子代，其中在达到性成熟后，F0呈表型雌性的XY小鼠能生育且生殖力旺盛。

4.如权利要求3所述的方法，其中步骤(d)还包括将所述小鼠宿主胚胎培养至胚泡期。

5.如权利要求2所述的方法，其中步骤(c)包括基于与来自所述第二群体的一个或多个小鼠XY ES细胞相比，来自所述第一群体的一个或多个小鼠XY ES细胞中的Ddx3y、Uty和Eif2s3y中的表达的至少90％的降低来选择所述供体小鼠XY ES细胞。

6.如权利要求2所述的方法，其中步骤(b)包括测定所述第一群体中至少两个所述小鼠XY ES细胞的Ddx3y、Uty和Eif2s3y中的所述一者或多者的表达，并且步骤(c)包括相对于其它测定细胞在步骤(b)中测定的具有Ddx3y、Uty和Eif2s3y中的所述一者或多者的最低表达的细胞选作所述供体小鼠XY ES细胞。

7.如权利要求2所述的方法，其中步骤(c)中的所述供体小鼠XY ES细胞缺乏Ddx3y、Uty和Eif2s3y中的所述一者或多者的表达。

8.如权利要求7所述的方法，其中步骤(c)中的所述供体小鼠XY ES细胞缺乏Ddx3y、Uty和Eif2s3y的表达。

9.如权利要求1-8中任一项所述的方法，其中通过相较于来自所述第二群体的所述一个或多个小鼠XY ES细胞，来自所述第一群体的所述一个或多个小鼠XY ES细胞中的Ddx3y、Uty和Eif2s3y的表达的90％的降低来在步骤(b)中鉴定所述雌性化活性。

10.如权利要求9所述的方法，其中如果来自所述第一群体的所述一个或多个小鼠XYES细胞中的Ddx3y、Uty和Eif2s3y的mRNA表达比来自所述第二群体的所述一个或多个小鼠XY ES细胞中的Ddx3y、Uty和Eif2s3y的mRNA表达低至少90％，则在步骤(b)中鉴定出雌性化活性。