[发明专利]稀有细胞的无离心机分离和检测

权利要求书

1.用于分离流体样品中的目标实体的添加性的直接稀释方法，所述方法包括以下述顺序进行的下述步骤：

向所述流体样品中加入所述流体样品的体积的至少0.5倍体积的稀释剂以产生第一混合物，其中所述稀释剂的体积足以获得低于所述流体样品的粘度的特定粘度的所述第一混合物；

向所述第一混合物中加入大量缀合有结合部分的磁珠以产生第二混合物，其中所述缀合有结合部分的磁珠中的结合部分能够特异性结合所述目标实体上表达的一种或多种配体，并且其中加入到所述第一混合物中的缀合有结合部分的磁珠的数量足以使所述目标实体磁化；

将所述第二混合物孵育一段时间，所述时间为至少5分钟至120分钟并且足以使所述缀合有结合部分的磁珠结合所述第二混合物中的目标实体，其中所述第二混合物的粘度基本上与所述第一混合物的特定粘度相同，并且其中所述第二混合物的粘度足够低以抑制所述缀合有结合部分的磁珠与所述流体样品中的非目标实体的非特异性结合；

使所述第二混合物的一部分以大于1.0mL/分钟的流速流入流体室；以及

施加磁力以将所述第二混合物中的磁化的稀有目标实体吸引到所述流体室内的分离表面，从而以添加性的方法分离稀有目标实体而不用去除最初流体样品的任何部分。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述目标实体是稀有细胞。

3.如权利要求1-2中任一项所述的方法，其中所述稀释剂包含缓冲溶液。

4.如权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述结合部分是一种或多种不同的抗体，并且所述配体是所述抗体能特异性结合的一种或多种抗原。

5.如权利要求1-4中任一项所述的方法，其进一步包括：

在使所述第二混合物流入所述流体室之后，使洗涤溶液流入所述流体室。

6.如权利要求1-5中任一项所述的方法，其进一步包括：

在将所述洗涤溶液注入所述流体室之后，使缓冲溶液流入所述流体室。

7.如权利要求1-6中任一项所述的方法，其进一步包括：

在使所述第二混合物流入所述流体室之前，钝化所述流体室的检测表面。

8.如权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所述流体样品包括血液，并且所述方法进一步包括：

使用至少1.0ml/分钟的流速，使红细胞裂解缓冲液流过所述流体室以从所述分离表面去除红细胞。

9.如权利要求1-8中任一项所述的方法，其中所述红细胞裂解缓冲液在1分钟至10分钟的时间流过所述流体室。

10.如权利要求1-9中任一项所述的方法，其中所述稀释剂包括磷酸盐缓冲盐水溶液，并且其中所述稀释剂具有稀释剂体积比流体样品体积为1:1至1:4的稀释比例。

11.如权利要求1-10中任一项所述的方法，其中所述缀合有结合部分的磁珠的直径为10纳米至50微米。

12.如权利要求1-11中任一项所述的方法，其中所述缀合有结合部分的磁珠与EpCAM抗体缀合。

13.如权利要求1-12中任一项所述的方法，其中使所述第二混合物流入所述流体室包括：

将离开所述流体室的所述第二混合物的至少一部分重新导向至能容纳所述第二混合物的所述部分的容器或者能输送所述第二混合物的所述部分的导管；以及

使来自所述容器或通过所述导管的所述第二混合物的所述部分流入所述流体室的入口。