[发明专利]用于治疗1A型糖原贮积病的材料和方法

权利要求书

1.一种通过基因组编辑来编辑人细胞中的葡萄糖-6-磷酸酶催化性(G6PC)基因的方法，所述方法包括下述步骤：在所述人细胞中引入一种或多种脱氧核糖核酸(DNA)内切核酸酶以实现在G6PC基因或编码G6PC基因的调节元件的其它DNA序列内或附近的一个或多个单链断裂(SSB)或双链断裂(DSB)，其导致一个或多个外显子在G6PC基因内或附近的永久插入、所述外显子的表达或功能的校正或调节，或影响G6PC基因的表达或功能，并导致葡萄糖-6-磷酸酶(G6Pase)蛋白活性的恢复。

2.一种通过基因组编辑将G6PC基因插入人细胞中的方法，所述方法包括：在所述人细胞中引入一种或多种脱氧核糖核酸(DNA)内切核酸酶以实现在安全港基因座内或附近的一个或多个单链断裂(SSB)或双链断裂(DSB)，其导致G6PC基因的永久插入和G6Pase蛋白活性的恢复。

3.一种用于治疗具有1a型糖原贮积病(GSD1a)的患者的离体方法，所述方法包括下述步骤：

i)制备患者特异性的诱导性多能干细胞(iPSC)，或在iPSC的安全港基因座内或附近编辑；

ii)在所述iPSC的葡萄糖-6-磷酸酶催化性(G6PC)基因或编码G6PC基因的调节元件的其它DNA序列内或附近编辑；

iii)使编辑过基因组的iPSC分化成肝细胞；和

iv)将所述肝细胞移植进所述患者中。

4.根据权利要求3所述的方法，其中所述制备步骤包括：

a)从所述患者分离体细胞；和

b)将一组多能性相关基因引入所述体细胞中以诱导所述体细胞变成多能干细胞。

5.根据权利要求4所述的方法，其中所述体细胞是成纤维细胞。

6.根据权利要求4所述的方法，其中所述组的多能性相关基因是一种或多种选自以下的基因：OCT4、SOX2、KLF4、Lin28、NANOG和cMYC。

7.根据权利要求3-6中的任一项所述的方法，其中所述编辑步骤包括：在所述iPSC中引入一种或多种脱氧核糖核酸(DNA)内切核酸酶以实现在G6PC基因或编码G6PC基因的调节元件的其它DNA序列内或附近的一个或多个单链断裂(SSB)或双链断裂(DSB)，其导致一个或多个外显子在G6PC基因内或附近的永久插入、所述外显子的表达或功能的校正或调节，或影响G6PC基因的表达或功能，或一个或多个外显子在安全港基因座内或附近的永久插入、所述外显子的表达或功能的校正或调节，并导致葡萄糖-6-磷酸酶(G6Pase)蛋白活性的恢复。

8.根据权利要求7所述的方法，其中所述安全港基因座选自AAVS1(PPP1R12C)、ALB、Angptl3、ApoC3、ASGR2、CCR5、FIX(F9)、Gys2、HGD、Lp(a)、Pcsk9、Serpina1、TF和TTR。

9.根据权利要求3-8中的任一项所述的方法，其中所述分化步骤包括以下一个或多个以使编辑过基因组的iPSC分化成肝细胞：使所述编辑过基因组的iPSC与激活素、B27补体、FGF4、HGF、BMP2、BMP4、制癌蛋白M、地塞米松(Dexametason)中的一种或多种接触。

10.根据权利要求3-9中的任一项所述的方法，其中所述移植步骤包括，通过移植、局部注射或全身输注或它们的组合将所述肝细胞移植进所述患者中。