[发明专利]聚合酶组合物和套组以及其使用与制造方法

权利要求书

1.一种包含重组DNA聚合酶的组合物，其中所述DNA聚合酶展现聚合酶活性，并且是相对于SEQ ID NO:35包含取代的突变聚合酶，其包含：

(a)选自由以下组成的群组的单个氨基酸取代：E30K、G209Q、E220H或E220T、P236I或P236R、E245R、L252R、S260K、D264K或D264M、E267M或E267K或E267R、E277T、T324R、E325R、A344Y、E442R或E442Y、E456R、D480L、N485R、A492K、E493G或E493R、M495C、N517C或N517K、和E522C，其中编号相对于SEQ ID NO:35；或

(b)L252R、H473G和H528T所示的三个氨基酸取代，其中编号相对于SEQ ID NO:35。

2.根据权利要求1所述的组合物，其中当在其中检测出氢离子的合成测序反应中使用时，相比于使用SEQ ID NO:35获得的准确度，所述重组DNA聚合酶产生较低误差率、改进的准确度和/或提高的信号。

3.根据权利要求1或2所述的组合物，其中所述重组DNA聚合酶包括L252R、H528T和H473G，其中编号相对于SEQ ID NO:35。

4.根据权利要求1或2所述的组合物，其中所述重组DNA聚合酶包括L252R，其中编号相对于SEQ ID NO:35。

5.根据权利要求2所述的组合物，其中所述重组DNA聚合酶具有SEQ ID NO:119的序列。

6.根据权利要求1或2所述的组合物，其中所述重组DNA聚合酶不包含具有3'到5’核酸外切酶活性和/或5'到3'核酸外切酶活性的野生型Bst DNA聚合酶的链段。

7.一种用于进行聚合反应的方法，其包含

(a)在一种或多种核苷酸存在下，使权利要求1中定义的重组DNA聚合酶与核酸模板接触；以及，

(b)使用所述重组DNA聚合酶使所述一种或多种核苷酸中的至少一种聚合。

8.根据权利要求7所述的方法，其中在一种或多种核苷酸和盐存在下使所述重组DNA聚合酶与所述核酸模板接触，其中所述盐为KCl和/或NaCl。

9.根据权利要求8所述的方法，其中所述盐浓度为125mM到175mM。

10.权利要求7所述的方法，其中使用所述重组DNA聚合酶使所述一种或多种核苷酸中的至少一种聚合，在核酸存在下、在适用于所述核酸模板扩增的条件下进行，其中所述核酸模板被扩增。

11.根据权利要求10所述的方法，其中在一种或多种核苷酸和盐存在下使所述模板核酸与所述重组DNA聚合酶接触，其中所述盐为KCl和/或NaCl。

12.根据权利要求11所述的方法，其中所述盐以125mM到175mM的浓度存在。

13.根据权利要求10所述的方法，其中所述扩增为聚合酶链反应。

14.根据权利要求10所述的方法，其中所述扩增为乳液聚合酶链反应。

15.根据权利要求10所述的方法，其中所述扩增为等温扩增反应。

16.根据权利要求10所述的方法，其中所述扩增为重组酶聚合酶扩增反应。

17.根据权利要求10所述的方法，其中所述扩增为邻位连接扩增反应、滚环扩增反应或链置换扩增反应。