[发明专利]用于适应的方法

权利要求书

1.用于使厌氧微生物适应和选择更耐氧的厌氧微生物的方法，所述方法包括用经由逐步增加施加的电压和氧扩散的氧化应激的逐步双重诱导和为了改变抗氧化剂/氧化的对应物浓度比以调节氧化还原状态的抗氧化剂浓度的逐步降低组合氧化的对应物浓度的逐步增加来培养所述微生物的组合步骤，其中培养基中的溶解氧浓度维持在亚致死浓度，在所述浓度下一些但不是所有微生物被杀死，并且其中所述厌氧微生物变得更耐氧且因此稳定且稳健储存。

2.权利要求1的方法，其中所述抗氧化剂/氧化的对应物选自半胱氨酸/胱氨酸、谷胱甘肽/谷胱甘肽-氧化态、抗坏血酸/脱氢抗坏血酸、二硫苏糖醇/氧化的二硫苏糖醇和没食子酸/氧化的没食子酸。

3.权利要求1或权利要求2的方法，其中用于所述方法的起始条件选自以下中的一种或多种或全部：低或零氧流量、低施加电压、高浓度的抗氧化剂和低浓度或零浓度的氧化的对应物、以及已经除去氧的培养基。

4.权利要求3的方法，其中所述起始条件选自以下中的一种或多种或全部：8mM半胱氨酸、0mM胱氨酸、0.1V的施加电压和零或低氧流量。

5.权利要求4的方法，其中持续逐步改变，直至以下中的一种或多种或全部：3mM的最小半胱氨酸浓度、5mM的最大胱氨酸浓度、0.6V的最大施加电压、以及高氧流量。

6.权利要求1至4中任一项的方法，其中所述施加电压不超过0.6V，和/或半胱氨酸浓度不低于3mM，和/或胱氨酸浓度不高于5mM。

7.权利要求1至6中任一项的方法，其中一旦已经完成所述逐步改变，则所述方法包括在逐渐改变后达到的施加电压、氧扩散和抗氧化剂/氧化的对应物浓度比的最终条件下培养所述微生物的一个或多个进一步的步骤。

8.权利要求7的方法，其进一步包括其中进行进一步的逐步改变的步骤。

9.权利要求1至8中任一项的方法，其中所述方法或进一步的步骤涉及将所述厌氧微生物重新接种至新的培养基中。

10.权利要求9的方法，其中所述重新接种涉及培养条件中的所述逐步改变。

11.权利要求1至10中任一项的方法，其中所述微生物是普拉梭菌(Faecalibacterium prausnitzii)。

12.权利要求1至11中任一项的方法，其中所述方法涉及进一步的步骤，其中筛选经适应的菌株的耐氧性、丁酸生产和/或生长动力学的评价，以选择具有维持的代谢特征的最佳的经适应的菌株。

13.用于增强产生厌氧微生物的方法，包括通过权利要求1-10中任一项的方法适应厌氧微生物并且选择更耐氧的厌氧微生物，并且进一步用恒定氧化电位/施加电压、氧扩散和抗氧化剂/氧化的对应物浓度比的组合来培养所述微生物，所述组合经过优化用于产生氧适应的微生物，其中培养基中的溶解氧浓度维持在亚致死浓度，因此实现选择压力并产生高产量的微生物。

14.权利要求13的方法，其中：(i)所述培养条件包括3mM半胱氨酸、5mM胱氨酸、0.6V的施加电压和0.2nmol ml^-1min^-1的氧流量；和/或(ii)所述微生物是普拉梭菌。

15.选自DSM 32380、DSM 32378和DSM 32379的普拉梭菌菌株。