[发明专利]超低分子角蛋白肽的制备方法及其的利用

说明书

本发明涉及超低分子角蛋白肽的制备方法及其的利用。上述超低分子角蛋白肽的制备方法利用包含角蛋白的培养基中的具有角蛋白分解活性的微生物的培养、超滤法、离子交换色谱法及凝胶过滤色谱法。根据本发明的角蛋白肽制备方法，可实现废弃资源的环保生物学处理及抗老化功能性超低分子角蛋白肽的有效的纯化及回收。并且，本发明的角蛋白肽通过分解胶原蛋白，来具有作为引起皮肤老化的酶的基质金属蛋白酶‑1的表达抑制能力和活性抑制能力，防止皮肤老化及改善皮肤皱纹的效果优秀，对皮肤细胞无毒性，从而适合用作皮肤皱纹的预防、改善或治疗用化妆品、药学、食品组合物，从而可有用地适用于高附加值功能性化妆品材料的有效且快速的制备及开发。

技术领域

本发明涉及超低分子角蛋白肽的制备方法及其的利用。具体地，本发明涉及利用包含角蛋白的培养基中的具有角蛋白分解活性的微生物的培养、超滤、离子交换色谱及凝胶过滤色谱的超低分子角蛋白肽制备方法，以及通过上述方法制备而成的肽及包含其的皮肤老化或皮肤皱纹预防或改善用化妆品、食品组合物。

背景技术

随着男女老少均对具有弹力且美丽的皮肤的关注度增加，在化妆品市场中，从现有的以健康为中心的化妆品越来越趋向可满足对美丽的渴望且有助于皱纹改善的功能性材料的发掘。尤其，角蛋白肽作为形成毛发、指甲、皮肤等形成上皮结构的基本的天然的氨基酸聚合物（50个以下氨基酸），由于与生物体内蛋白质的相互作用非常优秀，因此具有多种生理活性。

最近，因化妆品制备技术的均衡化，含有差别化的天然成分的新材料开发在化妆品产业中成为核心的话题，从而对作为天然材料的角蛋白肽的功能性高度关注。但是，在韩国国内，因对全量进口的功能性肽的原料的价格负担（每1kg为2亿韩元～30亿韩元）功能性肽化妆品开发非常慢，大部分情况下即使含有肽，也只不过含有极少量。

在以人类或家畜的疾病治疗为目的所使用的医疗用肽（包括疫苗）的情况下，尽管是极微量，但大部分都是高价产品。即使是功效非常优秀的肽，也大部分为大小由15个以上的氨基酸组成的聚合物（分子量为3kDa以上），从而皮肤角质渗透性向细胞内部的吸收不容易。因此，在肽新材料开发中最核心的要素为1）肽的功效、2）肽的大小（分子量）、3）确定生产成本的选择性分离及高纯度纯化技术。

当前，为了产业上利用的低分子肽的分离及制备，依赖于超滤膜，在高价的医药用肽的情况下，通过复杂的色谱法进行纯粹分离而使用。通常，为了对通过合成方法或重组方法生产的高分子进行纯化，如肽及蛋白质等，典型地，为利用疏水性相互作用的反相液相色谱法（“RP-LC”：reverse phase liquid chromatography）及反相高效液相色谱法（“RP-HPLC”：reverse phase high-performance liquid chromatography）。

反相液相色谱法及反相高效液相色谱法可有效地分离密切相关的杂质，并且可对多个多种分子进行纯化，尤其，利用为用于制备产业规模的蛋白质的大量纯化工序。尤其，为了纯化肽蛋白纯化，在反相色谱法中，作为媒质最普遍使用附着于二氧化硅表面的C-4、C-8及C-18烷基链。在这种反相液相色谱法中纯化的核心为固定相的树脂粒子的形状、大小、缓冲液类、流量、pH等。在蛋白质纯化中，虽然进行这种技术改善，但是在一部分经纯化的蛋白质中仍然存在相当量的杂质（比如，具有相反离子）。尤其，为了开发不是医药用的功能性化妆品材料，利用如上所述的高价的设备的分离方法在经济性及生产性方面非常低，从而在实际产业的适用中存在其局限。因此，为了开发来源于天然的功能性化妆品肽新材料，非常需要可有效且迅速地取得具有功效的功能性超低分子肽，同时需要经济、简单的色谱纯化工序的开发。

发明内容

对此，本发明人锐意努力开发从难分解性角蛋白分解产物可回收、分离具有皮肤抗老化功效的功能性角蛋白肽的工序，并开发纯化工序，选择性地对无需传递系统可有效且自由地渗透皮肤角质层和细胞膜的水平的超低分子肽进行分离。