[发明专利]基于脂肪来源的干细胞的干细胞疗法

权利要求书

1.一种组合物，其包含基本上同质且免疫抑制的成人脂肪组织来源的干细胞(ASC)群体在无蛋白质的冷冻保护剂中的混悬液，其浓度为至少1x10⁷个细胞/mL。

2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述ASC群体的至少约80％表达CD90、CD73、CD13、CD105、CD29、CD166、CD10、CD140b、CD160、CD204、CD272、CD44、CD49a、CD54、CD9、半乳凝素3、半乳凝素9、HLA-G和LTβR，并且所述ASC群体的至多约15％表达CD45、CD19、CD14、CD106、CD31和CD36。

3.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中在所述ASC群体中，

至少90％表达CD90、CD73、CD13、CD29和CD166；至多5％表达CD45、CD19、CD14和CD31；至多10％表达CD106；2～15％表达CD36；至少10％表达CD146；至少80％表达CD105并且至多40％表达CD34；且/或

至少90％表达CD10、CD140b、CD160、CD204、CD272、CD44、CD54、CD9、半乳凝素3、半乳凝素9、HLA-G和LTβR；至少80％表达CD49a；至少60％表达CD258和CD270且至少5％表达CD200；至多15％表达CD15、CD152、CD163、CD18、CD274、CD39、CD40、CD62L、CD80和CD86；并且至多30％表达CXCR4。

4.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中在干扰素-γ刺激时，表达CD274的ASC群体的百分比增加到至少80％，并且CD54阳性细胞上的CD54表达水平增加至少25倍。

5.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中在解冻后即刻至少80％的干细胞群体是活细胞，并且当培养48小时时，干细胞群体具有至少为1的群体倍增数。

6.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述冷冻保护剂包含Trolox(6-羟基-2,5,7,8-四甲基苯并二氢吡喃-2-羧酸)、Na⁺、K⁺、Ca²⁺、Mg²⁺¹Cl^—、H₂PO₄^—、HEPES、乳糖醛酸盐、蔗糖、甘露醇、葡萄糖、葡聚糖-40、腺苷和谷胱甘肽，以及约5％至约15％的DMSO。

7.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其是药物组合物。

8.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其是冷冻的。

9.一种细胞库，其包含在冷冻条件下储存的多个小瓶，每个小瓶包含约5mL根据权利要求7所述的组合物，其中细胞浓度在约2.0×10⁷至约2.5×10⁷个细胞/mL的范围内。

10.一种用于制备包含基本上同质的成人干细胞群体的组合物的方法，包括以下步骤：

(i)将从供体收集的脂肪抽吸物的基质血管部分(SVF)加入到生物反应器中，在所述生物反应器中至少一个表面经过预处理以促进成人干细胞的粘附；

(ii)在所述生物反应器中，在补充有人血小板裂解物的无血清培养基中培养粘附细胞至汇合；

(iii)分离所述粘附细胞；

(iv)以至少1×10⁶个细胞/mL的浓度在冷冻保护剂中冷冻分离的细胞；

(v)使冷冻的细胞解冻并将步骤(ii)和(iii)以及任选的(iv)重复至少一次，

(vi)以至少1×10⁷个细胞/mL的浓度冷冻分离的细胞；和

(vii)任选地，使冷冻的组合物解冻。