[发明专利]干细胞培养方法在审
申请号: | 201680060399.X | 申请日: | 2016-12-06 |
公开(公告)号: | CN108350426A | 公开(公告)日: | 2018-07-31 |
发明(设计)人: | 阿勒库协·古拉德克夫 | 申请(专利权)人: | 金太郎细胞力量株式会社 |
主分类号: | C12N5/0775 | 分类号: | C12N5/0775 |
代理公司: | 北京汇智英财专利代理事务所(普通合伙) 11301 | 代理人: | 郑玉洁 |
地址: | 日本东京都品川区*** | 国省代码: | 日本;JP |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 干细胞 培养容器 萃取 骨髓抽吸 抹片 干细胞培养 培养液培养 中间层 多层 分层 上层 | ||
1.一种使用收集自一捐赠者的一第一骨髓抽吸抹片,以培养特定种类的干细胞的干细胞培养方法,其特征在于,其中,
该干细胞培养方法包括:
一骨髓抽吸抹片分离步骤,将收集自该捐赠者的第一骨髓抽吸抹片分为多层;
一骨髓抽吸抹片萃取步骤,自于该骨髓抽吸抹片分离步骤分离为多层的第一骨髓抽吸抹片中的一中间层萃取一第二骨髓抽吸抹片;
一干细胞第一萃取步骤,将该骨髓抽吸抹片萃取步骤中萃取的第二骨髓抽吸抹片及一预定培养液注入一第一培养容器,该第一培养容器具有一预定体积,该第一培养容器的一底表面具有一预定面积,将该第一培养容器静置一预定时间,使一第一干细胞固定于该第一培养容器的底表面,并进行增殖,当该第一干细胞于该第一培养容器的底表面扩张一平面形状,使该第一干细胞的总表面积相对于该第一培养容器的底表面积达一第一目标比时,自该第一培养容器萃取该第一干细胞;
一干细胞离心步骤,将于该干细胞第一萃取步骤中萃取的第一干细胞离心以分离为多层;
一干细胞第二萃取步骤,于以该干细胞离心步骤将该第一干细胞分离为多层后,萃取位于最底层的第二干细胞;及
一干细胞第三萃取步骤,将于该干细胞第二萃取步骤中萃取的第二干细胞及该预定培养液注入一第二培养容器,该第二培养容器具有相比于该第一培养容器较大的容量及较大的底表面积,将该第二培养容器静置一预定时间,使该第二干细胞固定于该第二培养容器的底表面,并进行增殖,及当该第二干细胞于该第二培养容器的底表面扩张一平面形状,使该第二干细胞的总表面积相对于该第二培养容器的底表面积达一第二目标比时,自该第二培养容器萃取该第二干细胞。
2.如权利要求1所述的干细胞培养方法,其特征在于,其中,该干细胞培养方法包括:
一变形第一观察步骤,将该骨髓抽吸抹片萃取步骤中萃取的第二骨髓抽吸抹片及该培养液注入该第一培养容器,接着,将该第一培养容器以一预定角度倾斜的状态,静置该第一培养容器一预定时间,于该预定时间的期间,每隔一预定时间的间隔,观察于该第一培养容器中的第一干细胞自一起始平面形状的变形状态(deformation);及
一总表面积第一观察步骤,当该变形第一观察步骤的观察结果为该第一干细胞自该起始平面形状变形为一预定平面形状,即判断该第一干细胞已固定于该第一培养容器的底表面,以将该培养液自该第一培养容器中取出,并将一新的培养液注入该第一培养容器中,及将该第一培养容器以一预定角度倾斜的状态,静置该第一培养容器一预定时间,于该预定时间的期间,每隔一预定时间的间隔,观察固定于该第一培养容器的底表面的第一干细胞的总表面积相对于该第一培养容器的底面积,当该总表面第一观察步骤的观察结果为该第一干细胞进行增殖使该第一干细胞的平面形状扩张,且该第一干细胞的总表面积相对于该第一培养容器的底表面积达该第一目标比时,于该干细胞第一萃取步骤中,自该第一培养容器萃取该第一干细胞。
3.如权利要求2所述的干细胞培养方法,其特征在于,其中,该干细胞培养方法包括:
一变形第二观察步骤,将该干细胞第二萃取步骤中萃取的第二干细胞及该培养液注入该第二培养容器,接着,将该第二培养容器以一预定角度倾斜的状态,静置该第二培养容器一预定时间,于该预定时间的期间,每隔一预定时间的间隔,观察于该第二培养容器中的第二干细胞自一起始平面形状的变形状态;及
一总表面积第二观察步骤,当该变形第二观察步骤的观察结果为该第二干细胞自该起始平面形状变形为一预定平面形状,即判断该第二干细胞固定于该第二培养容器的底表面,以将该培养液自该第二培养容器中取出,并将一新的培养液注入该第二培养容器中,及将该第二培养容器以一预定角度倾斜的状态,静置该第二培养容器一预定时间,于该预定时间的期间,每隔一预定时间的间隔,观察固定于该第二培养容器的底表面的第二干细胞的总表面积相对于该第二培养容器的底表面积,当该总表面积第二观察步骤的观察结果为该第二干细胞进行增殖使该第二干细胞的平面形状扩张,且该第二干细胞的总表面积相对于该第二培养容器的底表面积达该第二目标比时,于该干细胞第三萃取步骤中,自该第二培养容器萃取该第二干细胞。
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